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哺乳动物卵巢中,卵泡闭锁是卵泡生长和发育过程中的白发性退化过程。经研究表明,卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起,与细胞凋亡相关的基因有很多已经被鉴定,如p53基因,正常细胞中p53蛋白半衰期很短,当细胞面临各种外界刺激时,p53蛋白经过不同的翻译后修饰而稳定；有研究表明人p53蛋白能够被SUMO化修饰,该修饰使p53蛋白稳定性增强,但对其活性的影响还有争议；此外,关于p53与小鼠卵巢颗粒细胞凋亡之间具体关系的研究还较少。本研究的主要目的是揭示小鼠卵巢颗粒细胞中p53能否被SUMO化修饰、该修饰对p53的影响是否参与p53的功能调控。实验设计和结果如下：本课题利用小鼠卵巢颗粒细胞体外培养模型,通过p53、sumo-1和ubc9真核表达质粒单独转染或共转染颗粒细胞的方法,揭示p53的SUMO化修饰模式,确定p53的SUMO化结合位点以及SUMO化修饰对p53稳定性和定位的影响。通过检测p53的SUMO化修饰对其生物活性的影响,包括对颗粒细胞增殖、凋亡及增殖和凋亡相关基因的表达,初步揭示p53的SUMO化修饰及其对颗粒细胞的细胞增殖和凋亡调控的影响。实验结果表明：(1)p53b蛋白能够被SUMO-1修饰,通过p53b和潜在SUMO化位点突变的p53b真核表达质粒分别与sumo-1真核表达质粒共转染的方法,鉴定了p53b的SUMO-1结合位点为lys375；(2)通过递增剂量sumo-1真核表达质粒和固定剂量p53b真核表达质粒共转染颗粒细胞发现p53b蛋白经SUMO-1修饰后呈剂量依赖性增强其稳定性,并且SUMO-1修饰能够影响p53的定位；(3)另外,突变p53b的SUMO化位点,能够显著降低其促颗粒细胞凋亡的能力,同时对其增殖水平影响不显著：(4)过表达p53b显著下调了CHK1基因表达水平,同时显著上调PCNA和Bax基因表达水平,突变p53b的SUMO化位点,对CHK1和PCNA的表达水平无影响,但却显著降低了Bax的表达水平,揭示了p53对颗粒细胞增殖调控可能是通过负调控CHK1实现的,同时其SUMO-1修饰可能不参与其促细胞增殖调控过程,相反SUMO-1修饰参与p53b调控的促颗粒细胞凋亡过程。总之,本研究发现小鼠卵巢颗粒细胞内p53b的SUMO化修饰参与p53b功能的调控,该研究结果将为更好的理解卵泡颗粒细胞发育,卵泡闭锁,卵巢癌机制研究等提供理论依据,为人类生殖健康以及家畜遗传育种和繁殖提供理论研究基础。