目的:1、进一步完善脊髓性肌萎缩症(SMA)的基因诊断体系。2、进行SMA基因携带者的筛查,为遗传咨询提供依据。3、对SMN2基因进行定量研究,探讨SMN2基因拷贝数与临床表型之间的关系,进一步阐明SMA的发病机制。方法:1、联合应用PCR限制性酶切及变性高效液相色谱(DHPLC)技术对运动神经元生存基因(SMN1)7、8号外显子进行缺失检测。2、采用实时荧光定量PCR技术进行SMN1、SMN2基因的定量研究。3、用SPSS10.0统计软件包对正常对照、SMA家系成员及基因携带者之间SMN1拷贝数差异、不同类型患者SMN2拷贝数差异、患者生存时间与SMN2拷贝数之间的相关性等进行统计学分析。结果:1、PCR限制性酶切法发现51例SMA患者中有48例SMN1基因7号外显子缺失,47例8号外显子缺失。2、DHPLC将各种不同DNA成份以色谱峰的形式表现出来。正常标本依次呈现SMN1/SMN2、SMN2、SMN1三个峰。缺失SMN1的患者只有SMN2峰,缺失SMN2的正常人只有SMN1峰。 <WP=4>3、实时荧光定量PCR技术检测SMN1、SMN2基因拷贝数结果稳定、准确。4、从264名正常健康人、32名SMA家系成员中共筛查出了7名肯定的基因携带者。5、检测到了50名正常健康成人及51例不同类型SMA患者SMN2拷贝数,SMN2拷贝数与临床类型之间存在相关关系﹙R=0.682,P<0.01﹚。不同SMN2拷贝患者其生存时间存在显著性差异(P=0.02)。结论1、联合应用PCR-限制性酶切及DHPLC技术可对SMA进行快速基因诊断,使诊断的准确率和敏感性大大提高。2、在正常人群及SMA家系成员中进行了基因携带者的筛查,为遗传咨询提供了重要依据。3、SMN2拷贝数与疾病的严重程度呈负相关,可通过SMN2基因拷贝数对患者预后作出判断,并为基因治疗奠定了基础。