论文部分内容阅读
环氧合酶(cyclooxygenase)是前列腺素合成的关键酶，研究发现胃癌组织中环氧合酶-2(COX-2)的表达增高，COX-2的过度表达促进了胃癌血管的发生。以新生血管为靶点对肿瘤进行生物治疗成为近几年新的研究热点，抗血管发生治疗具有广谱、特异的抗肿瘤作用，毒副作用小，不易产生耐药性。然而COX-2与胃癌血管发生关系之间的具体机制仍不明确。本研究针对内皮细胞特异性的几种血管发生因子，以高表达COX-2的胃癌细胞系SGC7901及其反义核酸转染细胞为模型，观察胃癌细胞COX-2的改变对体外培养的内皮细胞增殖、迁移及其管状形成能力的影响，初步探讨COX-2的高表达在胃癌血管发生过程中的作用。主要实验方法及结果包括： 1、通过半定量RT-PCR和Western blot方法检测SGC7901、7901-P(空载体对照)、7901-AS(反义COX-2转染细胞)细胞中COX-2的蛋白及mRNA表达水平；反义核酸转染后，COX-2 mRNA及蛋白表达水平均较亲本细胞及其空载体转染细胞降低。 2、采用半定量RT-PCR技术检测三组细胞中内皮细胞特异性血管发生因子的表达；结果证实：反义核酸转染的胃癌SGC7901细胞血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血管生成素-1(angiopoitin-1，Ang-1)的表达明显下调，较亲本细胞及其空载体转染细胞降低。 3、收集肿瘤细胞条件培养基刺激内皮细胞，观察不同条件下内皮细胞增殖、迁移及其形成管腔样结构的能力；条件培养基刺激内皮细胞后，增殖的数目分别 第四军医大学硕士学位论文为(15.7士1.0)又l了(s哎79ox)、(16.3士22)x 104(7叨l一P)、(11，1士1.5)xl了(7901一AS)和(8 .4士2.2) Xl了(对照组)，共培养内皮细胞迁移的数目分别为48.8士3.7(SG〔!7901)、51.6士1.5(7901一P)、23.6士0.7(7901一AS)和17.8士l，8 (对照组)，内皮细胞在mai刀gel上所形成管状结构的长度分别为602士1.3 (SGC7901)、41.4土1.2(7901一P)、28.6士1.6(7901一S)和19.2士1.2(对照组)，统计学处理表明:反义核酸转染的胃癌SGf7901细胞引牛培养基刺激内皮细胞后，内皮细胞的增殖、迁移能力及其管状形成能力均较亲本细胞和空载体转染细胞刺激组下降(P<0 .05、P<0.01、P<0.01)。 4、裸鼠瘤体组织血管特异性分子硼因子染色发现:7901一As组微血管密度 (MVD)数目(6.8士1 .8)显著小于(P<0.05)S〔汇7901组(9.壮2.1)及7901一P组(9.几2.8)，说明反义核酸转染组肿瘤的血管生成显著较少。 以上实验表明:抑制胃癌细胞COX一2表达可降低内皮细胞的血管生成能力。COX-2的过度表达可能通过提高血管发生因子的水平来影响内皮细胞的增殖、迁移和血管形成，从而促进肿瘤的发生、发展及其转移。