婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV治疗大鼠膀胱癌的实验研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:george_zg
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目的:评价婴儿双歧杆菌(BI)介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)自杀基因治疗系统对SD大鼠膀胱癌的治疗效果,探讨其诱导大鼠膀胱癌组织细胞的凋亡及对大鼠膀胱癌组织Fas/FasL mRNA和蛋白表达的影响。方法:(1)构建重组质粒pGEX-TK。(2)构建婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统。(3)N-甲基亚硝基脲(MNU)膀胱灌注法诱导建立大鼠膀胱肿瘤模型,并随机分为生理盐水/GCV对照组(生理盐水组)、BI-pGEX-5X-1/GCV组(空质粒组)和BI-pGEX-TK/GCV治疗组(重组质粒组)。分别将生理盐水、BI-pGEX-5X-1、BI-pGEX-TK经尾静脉注射到各组荷瘤大鼠体内,联合腹腔注射GCV,疗程共4周。(4)治疗4周后,称取各组膀胱癌组织重量;TUNEL法检测各组肿瘤组织凋亡;RT-PCR、蛋白质印迹法(WB)检测各组肿瘤组织Fas/FasL mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)成功构建重组质粒pGEX-TK。(2)成功构建婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统。(3)重组质粒组荷瘤大鼠膀胱重量与空质粒组及生理盐水组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。(4)TUNEL法检测发现各组均出现不同程度的肿瘤细胞凋亡,与空质粒组及生理盐水组相比,重组质粒组凋亡最为显著(P<0.01)。(5)与空质粒组及生理盐水组相比,重组质粒组的荷瘤大鼠膀胱癌肿瘤组织细胞Fas/FasL mRNA及其蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:(1)双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统对大鼠膀胱肿瘤生长有明显抑制作用。(2)双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统对大鼠膀胱肿瘤的抑瘤作用可能通过激活Fas/FasL凋亡途径,诱导大鼠膀胱肿瘤细胞的凋亡产生的。
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