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研究目的:本课题旨在探讨目前已经被公认的干性因子在CCR9/CCL25通路介导的MOLT4细胞转移过程中所发挥的作用及其表达水平变化,研究在CCR9/CCL25通路中发挥了作用的干性因子在临床样本中与趋化性细胞因子受体9(CCR9)的相关性及其与临床预后的关系,并初步探讨使用抑制剂抑制在CCR9/CCL25通路激活时高表达的干性因子对MOLT4细胞的杀伤效果及转移抑制效果,为临床T-ALL的治疗及转移路径的抑制提供一种新的思路。研究方法:通过比较GEO数据库中CCR9在T-ALL患者和健康对照者以及前B淋巴细胞白血病(pre-B-ALL)患者中的表达差异和临床预后,评价CCR9与T-ALL的相关性,并通过CCR9高低表达组进行基因功能富集分析。应用Western blot和流式细胞术检测MOLT4细胞在CCL25处理前后干性因子C-myc、β-catenin、Klf4、Oct4、Bmi-1、Nanog、CD34、CD38、CD44 和 CXCR4 的表达变化。我们对在 CCR9/CCL25通路中表达发生变化的干性因子C-myc、β-catenin、Klf4和Nanog进行了与CCR9相关性的分析和累计生存分析,比较分析这些干性因子与CCR9的相关性及其对T-ALL患者预后的影响。细胞计数和CCK-8法检测细胞增殖。MTT检测抑制剂的细胞毒性。Transwell迁移实验检测MOLT4细胞在不同抑制剂处理后细胞的迁移能力。Matrigel-Transwell实验检测细胞的侵袭能力。研究结果:GEO数据库分析结果显示,CCR9在T-ALL患者中的表达水平明显高于健康对照组(P<0.01);且CCR9在βre-B-ALL患者中表达量明显低于T-ALL患者(P<0.001);累计生存分析发现CCR9高表达与患者不良临床预后相关。Western blot检测显示,在CCL25的刺激下,MOLT4细胞中PI3K/Akt/β-catenin信号通路被激活;同时GSEA显示CCR9高表达组在Hallmark的前20个富集结果中出现了PI3K/Ak/Mtor 和 Wnt/β-catenin 信号通路。Western blot 实验发现在 CCL25 处理 24h后C-myc和Klf4表达上升而Nanog表达下降;相关性分析和累计生存分析发现CCR9的表达与MYC成正相关,KLF4的表达有利于病人预后生存。流式细胞术检测发现,CD34、CD38、CD44和CXCR4四种膜相关干性因子在CCL25处理前后均无明显变化。细胞计数和CCK8实验发现CCL25处理后对MOLT4细胞增殖无明显影响。MTT实验发现β-catenin抑制剂IWR-1-endo和C-myc抑制剂10058-F4对MOLT4细胞均有一定杀伤作用,且IWR-1-end通过降低β-catenin的表达来发挥作用。Transwell迁移实验和Matrigel-Transwell侵袭实验结果显示,这两种抑制剂可显著抑制MOLT4细胞的迁移和侵袭能力。研究结论:干性因子C-myc、β-catenin、Klf4和Nanog参与了 CCR9/CCL25通路介导的MOLT4细胞的转移,且通过抑制剂抑制C-myc或β-catenin的功能或表达可以降低MOLT4细胞的转移能力。