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目的:深入探索肝癌的发病机制,寻找肝癌发生、发展的关键基因,观察不同常用肝癌中医治法的作用差异。
方法:采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,给予不同中医治法及喃氟啶分别干预治疗,观察大鼠体重、肝重、肝脏病理变化,用免疫组化方法检测Bax及Bcl2蛋白的变化;用基因芯片技术检测肝脏(含肝癌)基因转录调控的差异;并对肝癌高表达的已知基因进行文献检索分析;用经典的cDNA文库筛选方法筛选若干肝癌高表达的ESTs完整表达序列。
结果:DEN诱发大鼠肝癌模型成功,通过肝脏外观、病理切片观察到肝癌的形成过程,正常组与各治疗组大鼠体重存在显著的差异(P<0.05);免疫组化结果,模型组Bax表达与其它各组有显著的差异(P<0.05),正常组Bcl2表达与其它各组有显著差异(P<0.05);基因芯片检测,共得到16万个左右的数据,其中模型组肝癌组织有84.54%(每张芯片含有15710个基因)的基因有表达,模型组基因表达大于正常组基因(大于2倍)计2796个。将肝癌组织与正常肝组织所测的读数数值比较,求出比值,按比值由高到低排序,剔除比值小于5倍的,以及肝癌组织表达值读数在50以下的基因,共得到509个基因,其中325个基因是ESTs片段,184个为已知基因;运用经典的cDNA文库筛选方法,筛选出两个ESTs基因的3端未知序列。
结论:Bax免疫组化结果说明各中医治法及西药都具有提高Bax蛋白表达的作用,使癌细胞趋向凋亡,提示各中医治法对肝癌均有一定的治疗作用;基因芯片结果展示给我们大量的生物学信息,肝癌在分子水平上的变化是巨大的,中医不同治法对肝癌的调整作用是广泛的,其中有一些已知基因明显是对肝癌的治疗有着积极意义的,同时也有许多功能不明确的基因,中医药对其也有调整作用,为今后深入广泛地研究奠定了基础。同时,西药和中医不同治法调整作用不明显的肝癌高表达基因也需要进一步关注,它们和肝癌发生的关系可能也十分紧密;在本实验室率先应用经典的cDNA文库筛选方法,筛选出ESTs未知3末端序列,使得该筛选技术在所在实验中心日趋成熟,为以后的筛选工作奠定了坚实的基础。