C-G-HA-HS支架协同PCA对NS/PCs分化作用研究

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目前,采用细胞移植疗法将神经干/祖细胞(NS/PCs)移植入帕金森病(PD)受损部位可在一定程度上起到修复作用,但此方法仍存在缺陷。虽然NS/PCs具有分化成PD缺失的多巴胺(DA)能神经元潜能,但是移植后存活时间短,分化能力有限,不足以与周围组织建立功能联系,还需进一步完善。为了提高NS/PCs的存活和定向分化能力,体外构建可供NS/PCs扩增、分化的三维支架材料尤为重要。  本文采用冷冻干燥法制备了不同比例壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素(C-G-Ha-HS)复合支架,通过红外、孔径、孔隙率、吸水率、粘附率、降解性能测定,筛选出理想支架,经层粘连蛋白(LN)表面修饰,构建NS/PCs三维培养体系,同时考察了LN修饰的复合支架与NS/PCs的生物相容性及三维条件原儿茶酸(PCA)对NS/PCs定向分化的影响。傅里叶红外检测显示,所有支架交联成功,交联后支架上的酰胺基、磺酸基、酯键、酸酐能提供大量细胞粘附、迁移位点,促进NS/PCs分化;支架物理表征显示,C-G-Ha-HS复合支架孔径在120~130μm之间,孔隙率达到92%以上,具备吸水能力且易降解,更适合体外培养NS/PCs; CCK-8分析表明,LN修饰的C-G-Ha-HS复合支架的粘附率和细胞活力明显提高,培养4h后,LN修饰的C-G-Ha-HS(5∶5)复合支架细胞粘附率增加至未修饰组的113.53±4.32%,培养96 h后,细胞活力增加至未修饰组的120.30±6.65%;免疫细胞化学鉴定表明,在LN修饰的C-G-Ha-HS(5∶5)复合支架上,1%胎牛血清(FBS)和0.06 mM PCA协同作用,TH阳性细胞分化率增加至空支架组的172.72±6.79%; Nurrl阳性细胞分化率增加至空支架组的181.23±1.04%。综上所述,LN修饰的C-G-Ha-HS(5∶5)复合支架有效促进NS/PCs的粘附、增殖;同时,C-G-Ha-HS(5∶5)复合支架、LN、PCA和FBS协同作用,提高了NS/PCs向DA能神经元分化的能力和细胞分化显型的活力,为PCA进一步应用于NS/PCs移植治疗PD提供实验依据。
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