茶黄素作为一种茶叶所特有的色素物质，由于其具有极强的抗氧化及清除自由基的功能，近些年来受到研究者的广泛关注，并在保健和抗癌治癌等领域成为研究热点，是目前茶叶深度开发领域研究的热点成分，在天然药物、功能食品、日用化工、功能饮料等领域有着广泛的应用前景。茶黄素的合成机理是儿茶素在茶多酚氧化酶（PPO）的催化作用下氧化聚合形成邻醌，邻醌进一步缩合形成茶黄素。目前茶黄素的生产技术主要为体外酶促氧化的方法，其中多酚氧化酶是催化反应合成茶黄素的关键酶，如何得到大量、优质的酶源成为提高茶黄素生产技术的关键因素。本文旨在通过基因工程的手段，利用融合蛋白表达系统，构建出茶PPO的基因表达载体，并进一步将其转入优势表达菌中，以期构建出茶PPO基因工程菌，并对其进行应用基础研究，从而解决茶黄素生产的关键酶源问题，进而为茶黄素的工业化生产提供一定的理论依据和研究基础。主要研究结果如下：通过对各种CTAB法的综合与优化成功提取并纯化得到了纯度较高的迎霜茶树基因组DNA，并通过PCR扩增得到PPO的编码区片段。通过测序可知，迎霜茶树的PPO编码区序列长度为1800bp。并将其登录于GenBank，注册号为GQ214317。对PPO的核酸序列以及翻译得到的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明：所得到的迎霜品种茶树PPO基因与其他茶树基因都高度同源，相似性达到99%以上；PPO基因共编码599个氨基酸，分子式为C3008H4677N813O900S18，分子量为67207.2，理论等电点为6.24。PPO同属于酪氨酸酶、PPO1_DML和PPO1_KFDV三个超家族，且PPO的关键结构域Cu2+结合区具有高度的保守性；且PPO没有跨膜区，不存在信号肽，其存在于叶绿体的可能性最大，很有可能具有叶绿体转运肽。将克隆得到的PPO基因重组到pET-28a表达载体上，构建出原核表达载体pET-PPO，并将其转入E. coli BL21（DE3），实现了PPO的原核诱导表达。原核表达过程中，目的蛋白容易形成包涵体，酶的活性较低；SDS-PAGE电泳检测结果表明，在71KD处有一条特异蛋白条带，与预测大小相符。将克隆得到的PPO基因重组到pPICZα A融合蛋白表达载体上，构建出茶PPO的融合蛋白真核表达载体pPICZα-PPO2，并将其转入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中，成功筛选出多个阳性转化子。对阳性转化子进行甲醇诱导，采用Western-Blotting方法在培养液中成功检测到诱导表达的目的蛋白。酶活检测结果也显示诱导产物具有较高的相对酶活性，能够正确发挥酶蛋白的生物功能。对PPO的真核蛋白表达进行优化策略研究，首先对PPO基因进行改造，构建出茶PPO的融合蛋白真核表达载体pPICZα-PPO3和pPICZα-PPO4。然后将pPICZα-PPO2、pPICZα-PPO3和pPICZα-PPO4分别转入巴斯德毕赤酵母GS115、KM71和SMD1168三种酵母菌种中，得到9种PPO的重组转化子，同时筛选出相应的阳性转化子，并对其进行甲醇诱导表达，Western-Blotting结果表明：9种组合中，只有转化了pPICZα-PPO2的GS115重组酵母得到了PPO阳性表达。最后，对PPO基因工程菌进行应用基础研究显示：诱导表达的PPO的粗酶液酶活力为63.6U；遗传稳定性较好，在诱导3天后开始表达目的蛋白，并在7天后仍然保持目的蛋白的表达。