牙鲆肠道中乳酸菌粘附相关蛋白质的研究

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粘附(adhesion)是指细菌与粘液(mucus)或上皮细胞通过生物化学作用产生的特异性粘连,是细菌定植的第一步,肠道中各种粘附相关成分是细菌介导粘附的基础,对这些成分的研究分析是阐明益生菌对肠道粘附机理的必要条件,而粘附机理的深入研究对于消化道微生态环境的改善以及病原菌的生态防治均具有重要意义。益生乳酸菌在肠道中的定植能够排斥外来病原菌的入侵,从而起到生物抗菌的作用。本文应用体外粘附模型,研究了从健康牙鲆肠道中分离筛选的乳杆菌L15(Lactobacillus L15)等几株乳杆菌的粘附特性。发现细菌的种类不同,表现的粘附特性也不一致。所试菌株对牙鲆肠粘液、鲤鱼肠粘液、小鼠肠粘液和胶原均较好地粘附。以L15对牙鲆肠粘液的粘附最强,L. acidophilus对小鼠粘液的粘附最强。经表面蛋白提取和加入表面蛋白提取物后,L15和L. acidophilus的粘附率明显降低,说明在表面蛋白提取物中有粘附相关的蛋白质。乳杆菌及其表面蛋白提取物对致病菌的粘附有明显的抑制作用,说明细菌的粘附具有竞争性,L15等益生菌可以提前占位,减少病原菌侵害。此外,细菌粘附还表现出种属特异性,菌种的来源明显影响到其粘附特性,而且细菌的粘附相关成分存在于细菌表面,这一结论与资料报道的一致。通过凝胶电泳(PAGE)和用酯化生物素标记的乳杆菌L15表面蛋白进行蛋白印迹实验,结果显示,在牙鲆肠道前段的粘液和上皮细胞膜蛋白中显示有不同的粘附受体,在粘液中有分子量约为30.3kDa和29.7kDa的两个条带,在上皮细胞膜蛋白中除上述两种蛋白外,还显示一分子量小于14kDa的蛋白条带。在牙鲆肠道的后段,粘液和上皮细胞膜蛋白中均显示同样的30.3kDa和29.7kDa两个蛋白条带,盲囊中没有任何蛋白条带显示。这一结果说明乳酸杆菌对肠道的粘附不但具有菌种的特异性,而且也说明动物不同其粘附受体不同,就牙鲆而言,甚至是同一器官的不同部位也具有不同的受体成分,虽然这一观点还未见报道,但这与细菌对肠道粘附因素的复杂性相一致。
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