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目的:前列腺癌（Prostate carcinoma,PCa）是来源于前列腺腺上皮的恶性肿瘤。目前研究认为新生血管的形成与恶性肿瘤发生发展与预后存在相关性。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）可通过加快肿瘤位置的血管生成从而促进肿瘤的生长。此外,酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase B,TrKB）在肿瘤血管生成、生长、侵袭、转移以及针对预后存在不可或缺的效用。K252a能阻断TrKB-BDNF通路,观察体外培养的前列腺癌PC3细胞增殖、运动迁移、细胞周期、细胞凋亡及VEGF表达变化。目前研究发现VEGF通过诱导血管生成及促进血管内皮细胞分裂从而促进血管形成,而血管生成、微血管又与肿瘤侵袭转移有着密切关系,进而提出微血管密度（microvessel density,MVD）与肿瘤的转移和预后有关。体外细胞实验结果表明干预TrKB的表达可以影响前列腺癌PC3细胞中VEGF的表达,本部分实验通过建立裸小鼠移植瘤模型,再经K252a处理,观察动物体内VEGF表达和MVD的变化,探讨TrKB调控前列腺癌新生血管生成可能机制,为抗前列腺癌血管生成基因治疗寻找新的理论依据。方法:通过免疫组化方式测定235例人体前列腺癌病理组织和250例良性前列腺增生组织中VEGF及TrKB蛋白表达。以患者年龄、临床分型、原发灶大小、淋巴结转移和有无远处转移将病例分组,采用双变量相关pearson检验分析研究VEGF和TrKB的表达与临床病理特征之间的关系。以不同浓度K252a处理前列腺癌PC3细胞,阻断TrKB-BDNF通路,通过MTT实验比较不同浓度K252a对前列腺癌PC3细胞生长的影响,并计算细胞生存率,筛选出K252a最佳干预浓度;利用划痕愈合试验观察阻断TrKB-BDNF通路后前列腺癌PC3细胞运动迁移能力的变化;流式细胞术分析阻断TrKB-BDNF通路后前列腺癌PC3细胞周期的变化和凋亡情况;分别用RT-PCR、Western-blot检测阻断TrKB-BDNF通路后前列腺癌PC3细胞中VEGF、TrKB在mRNA和蛋白层面的表达变化。选取周龄4-6、雄性、体重16-20g的BALB/C-nu/nu裸鼠,于裸鼠右侧季肋部皮下注射人前列腺癌PC3细胞,建立荷人前列腺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型。自第一次注射药物后每隔2天测量1次裸鼠肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。于接种后第18天处死裸鼠,剥离肿瘤,测量瘤体体积和重量。取出部分组织的标本于固定于10%福尔马林溶液中,石蜡包埋,制作组织切片后,进行常规HE染色和VEGF、TrKB和CD31的免疫组化染色。结果:1.TrKB蛋白表达定位于癌细胞浆内,VEGF蛋白表达定位于癌细胞浆及血管内皮细胞浆。在235例前列腺癌中,186例表达TrKB阳性,阳性表达率为79.15%;192例表达VEGF阳性,阳性表达率为81.70%。250例良性前列腺增生组织中,21例TrKB阳性,阳性表达率8.40%;26例VEGF阳性,阳性表达率10.40%。癌组织中TrKB、VEGF阳性表达率明显高于良性前列腺增生组织（p<0.05）,癌组织中VEGF与TrKB表达有明显相关性（相关系数R=0.602.p<0.05）。2.TrKB蛋白表达与临床分期（p=0.004）、病理分级（p=0.004）及有无淋巴结转移（p=0.002）临床病理特征有显著相关性,与年龄（p=0.882）、肿瘤大小（p=0.542）及有无远处转移（p=0.892）无关;VEGF蛋白表达与临床分期（p=0.003）、病理分级（p=0.005）及有无淋巴结转移（p=0.001）临床病理特征有显著相关性。VEGF蛋白在前列腺癌组织中的表达水平与年龄（p=0.882）、肿瘤大小（p=0.412）及有无远处转移（p=0.903）无关。3.MTT实验:前列腺癌PC3细胞的增殖明显受到K252a的抑制,细胞数量减少、细胞密度减低、细胞生存率下降,前列腺癌PC3细胞生长的受抑制程度与K252a干预时间、浓度呈正相关。经K252a干预48小时,前列腺癌PC3细胞增殖率抑制最为明显,K252a的浓度为450nmol/L,细胞死亡约50%（与对照组相比）,故选取450 nmol/L为K252a最佳干预浓度。4.划痕愈合实验:TrKB-BDNF通路经K252a阻断后,划痕愈合时间延迟,与对照组相比,12小时前列腺癌PC3细胞迁移距离虽减少,但统计学差异不明显（p=0.099）,24h小时前列腺癌PC3细胞迁移距离减少明显（p=0.026）,表明通过抑制TrKB的表达能够抑制前列腺癌PC3细胞的运动迁移能力。5.流式细胞术分析:经K252a干预,与对照组相比,前列腺癌PC3细胞中处于G0/G1期的细胞显著增多（69.66+3.56vs 51.22+6.21,p=0.026）,处于S期的细胞显著减少（16.25+1.62vs32.21+2.31,p=0.033）,比较有统计学意义（p<0.05）。此方法测定前列腺癌症PC3细胞的凋亡状况,K252a干预组和对比组细胞的凋亡率比较有统计学意义（25.31+4.11vs4.23+0.99,p=0.016）。6.Western blot:与对照组相比,K252a干预组TrKB蛋白表达水平下调（0.312±0.019 vs 0.659+0.023）,VEGF蛋白表达水平下调（0.323±0.042 vs 0.689±0.012）,差别均具有统计学意义（p<0.05）。7.RT-PCR:与对照组相比,K252a干预组细胞内TrkB mRNA表达下调（0.413+0.065 vs 0.682±0.025）;VEGF mRNA表达下调（0.412±0.015 vs 0.659+0.050）,差异有统计学意义（p<0.05）。8.肿瘤标本的形态及HE染色:接种后第4天,实验动物成瘤成功。肿瘤具有较完整包膜,与周围组织界限较清楚。K252a干预组皮下肿瘤瘤体较小,呈不规则球形、分叶形,切面灰白色,质地较硬,剖面呈白色。对照组瘤体较干预组体积明显增大,表面不平整,呈分叶结节状,切面灰白色伴微灰红色;9.实验动物瘤体体积变化:自给药开始,K252a干预组肿瘤生长缓慢,第18天肿瘤瘤体体积为（361.26±49.6）mm3,对照组为（1132±201.26）mm3:10.CD31标记的MVD计数与VEGF、TrKB免疫组化染色对比及相关性分析:干预组和对照组阳性血管计数分别为25.65±5.36、49.36±4.36,经方差分析,各组间差别具有显著性（p<0.05）。相比对照组,干预组VEGF表达明显下降,二者间具有统计学差异（3.32±0.54vs6.56±1.02,p=0.007）,干预组TrKB表达也明显下降,并有统计学差异（3.93±0.36 vs 6.53±1.03,p=0.035）,各组VEGF表达与MVD具有相关性（对照组:r=0.726,p=0.008;K252a组:r=0.956,p=0.02）,TrKB表达与MVD呈正相关（对照组:r=0.801,p=0.031,K252a组:r=0.865,p=0.03）。结论:1.VEGF,TrKB在前列腺癌组织中表达增加,提示其与前列腺癌的发生发展和血管形成有关;2.TrKB-BDNF通路阻断后,前列腺癌PC3细胞生长、迁移能力降低;同时可通过促进细胞凋亡、改变细胞周期和降低VEGF表达,从而抑制前列腺癌PC3生长与迁移能力;3.TrKB通过调控VEGF的表达影响前列腺癌血管形成。4.抑制TrKB的表达能够抑制前列腺癌移植瘤在动物体内的生长:并能通过减少VEGF的表达减少癌组织内的新生血管的形成;5.TrKB有可能成为抗前列腺癌新生血管治疗的新靶点。