研究背景肺癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤,其发病率及死亡率均居恶性肿瘤前列[1,2],导致肺癌高死亡率的重要原因是单纯化疗或放疗不能很好的控制癌症的发展。近年来,热疗作为继手术、放疗、化疗、生物治疗之后的第五种治疗方法引起了人们广泛的关注[3],肿瘤热疗有了很大发展。临床上常使用热疗配合放化疗[4]治疗肺癌,但理论研究的滞后严重影响了热疗临床实践的深入。目前,国内外对不同病理类型的肿瘤细胞对热疗的敏感性差异的研究未见报道,热疗合用不同化疗药物对肿瘤细胞的影响及其可能的分子生物学机制值得深入研究。长春瑞滨(NVB)、顺铂(DDP)、吉西他滨(GEM)、多西他赛(TAX)、依托泊苷(VP-16)均为临床应用广泛的化疗药物,对肺癌有较好的治疗效果,他们与热疗联合作用的效果值得进一步探讨。目的以人肺腺癌A549细胞株和人小细胞肺癌SBC-5细胞株为研究对象,观察不同温度条件下热疗及其与化疗药长春瑞滨(NVB)、顺铂(DDP)、多西他赛(TAX)、吉西他滨(GEM)、依托泊苷(VP-16)联合对两细胞株的作用效果,探讨不同病理类型的肺癌细胞株对热疗的敏感性差异及可能的分子生物学机制,并对热疗与五种化疗药的联合作用效果进行初步评价,为肺癌的临床热疗和热化疗提供实验依据。方法1、应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法测定细胞增殖,确定长春瑞滨(NVB)、顺铂(DDP)、多西他赛(TAX)、吉西他滨(GEM)、依托泊苷(VP-16)的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24h细胞生存率,根据Veleriote法[5]判断热化疗联合24h的作用效果;2、24h流式细胞仪检测长春瑞滨与42℃单独或联合对A549细胞株的凋亡和周期的影响情况;3、24h流式细胞仪检测依托泊苷与42℃单独或联合对SBC-5细胞株的凋亡和周期的影响情况;4、透射电镜观察依托泊苷与42℃单独或联合对SBC-5细胞株超微结构的变化情况。结果1、单独热疗、单独化疗或热化疗联合均对肺癌细胞株的生长有抑制作用,且抑制率随着热疗温度的升高、化疗药物浓度的增加而增强(P<0.05),热化疗组抑制率尤为明显(P<0.01);以24h时IC10～IC20的药物浓度作为试验的工作浓度,确定药物对两株细胞的工作浓度为:NVB 1ug/ml,DDP 0.1ug/ml,TAX 1ug/ml,GEM 0.1ug/ml,VP-16 0.1ug/ml;根据Veleriote法[5]判断热化疗联合24h的作用效果:NVB、DDP、TAX、GEM、VP-16与热疗联合均表现出协同或次加作用;2、A549细胞周期分析发现42℃热疗(42℃,1h)降低了S期细胞所占比例;单独化疗组(NVB,1ug/ml)使细胞周期阻滞于G2/M期;与单独化疗组(NVB,1ug/ml)相比热化疗组(42℃+ NVB,1ug/ml,1h)的S期细胞所占比例减少,G2/M期细胞增多;对照组、热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率分别为1.5%、7.9%、13.9%、29.1%;3、SBC-5细胞周期分析发现42℃热疗(42℃,1h)降低了S期细胞所占比例;单独化疗组(VP-16,0.1ug/ml)使细胞周期阻滞于G2/M期;与单独化疗组(VP-16,0.1ug/ml)相比热化疗组(42℃+ VP-16,0.1ug/ml,1h)的G2/M期细胞所占比例减少,S期细胞增多;对照组、热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率分别为3.3%、6.9%、10.3%、21.1%;4、透射电镜下见(SBC-5):对照组细胞核大,核仁清楚,染色质均匀,细胞器结构正常,胞膜完整;热疗组(42℃,1h)染色质凝集,核膜完整,细胞器结构肿胀;化疗组(VP-16,0.1ug/ml)细胞皱缩,胞质浓缩,染色质聚集于核膜;热化疗组(42℃+ VP-16,0.1ug/ml,1h)细胞碎裂成凋亡小体,胞膜完整,染色质不均匀分布于各个小体内。结论1、单独热疗与单独化疗均对两株细胞有抑制作用(P<0.05);2、SBC-5细胞株对热疗、热化疗较A549细胞株敏感;3、热疗与五种化疗药物联合表现有协同或次加增敏作用(P<0.01);4、热、化疗联合增敏作用机制复杂,可能与干扰细胞周期、改变细胞超微结构有关。