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目的：克隆并鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)NCTC 11637 IV型分泌系统cagX(HP0528)的全长编码基因，构建原核表达载体，表达并纯化CagX蛋白，纯化的CagX蛋白与SGC 7901细胞共培养，初步探讨其生物学功能。为进一步探讨CagX蛋白在T4SS中的作用及T4SS的致病机制研究奠定基础。
方法：
1.将标准菌株H.pylori NCTC 11637涂布在哥伦比亚培养基上，37℃微需氧条件下培养4天，培养物经菌落特征，革兰染色镜检菌体形态，快速尿素酶试验和氧化酶试验鉴定；
2.用PCR方法从Hp基因组DNAq中扩增cagX码基因片段，将cagX克隆至pGEM-T载体，转化大肠杆菌DH5α，再将其定向插入pET32a(+)载体中，经IPTG诱导表达；SDS-PAGE分析表达结果，并进行序列测定和生物信息学预测；
3.将原核表达的CagX蛋白用Ni2+-NTA柱进行分离纯化，纯化的蛋白经SDS-PAGE电泳及Western-Blot进行鉴定；
4.将纯化的CagX蛋白与SGC 790 1细胞进行共培养，运用MTT和形态学观察CagX蛋白对细胞增殖的影响。
结果：
1.PCR扩增获得cagX基因全长1 569 bp目的片段，GenBank登录号为EF608160。cagX基因是一类高度保守的原核型基因，与H.pylori其他菌株的同源性在96％～99％，与真核生物无同源序列。三种标准菌株间氨基酸序列的差异导致的二级结构有很小的差异，但三种菌株的抗原性完全相同。根据生物进化树分析发现：NCTC 11637与NCTC 11638及cosmid clone 36的序列相似性比22695要高；
2.获得pET32a-cagX原核表达重组质粒，确定终浓度1mmol/L IPTG，温度30℃，诱导时间4h为最佳诱导条件，获得原核表达的融合CagX蛋白，大小约为81KD，并用Ni2+-NTA柱进行分离纯化；
3.将纯化的CagX蛋白与SGC 7901细胞进行共培养：通过MTT和形态学观察发现CagX蛋白在一定程度上对SGC 7901细胞的增殖存在影响。
结论：
1.成功构建pET32a-cagX重组质粒，插入序列经测序证实对码正确，无移码，与GenBank公布的基因序列高度同源；
2.成功表达CagX蛋白，为研究H pylori IV分泌系统蛋白功能奠定基础；
3.CagX蛋白一定程度上对SGC 7901细胞增值存在影响。