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胆管癌是起源于胆管上皮细胞的一种恶性肿瘤,分为肝内胆管细胞癌和肝外胆管细胞癌,其中肝内胆管癌是第二常见的肝脏原发性恶性肿瘤,其发病率正逐年升高。因其早期没有特异性的临床症状,大部分患者一经诊断即为晚期,失去了手术治疗的最佳机会。肝内胆管癌患者发生局部的侵袭与转移后,通常面临不良的预后,生存率明显降低。因此,寻找调节肝内胆管癌患者发生侵袭与转移的分子靶点,并阐明其发挥作用的具体机制,对于提高肝内胆管癌患者的预后具有十分重要的意义。研究表明SVEP1是整合素α9β1的配体,参与细胞的黏附过程,对肿瘤的侵袭和转移性具有重要意义。最新研究发现SVEP1在肝细胞癌中可以促进肿瘤我的增殖迁移和侵袭能力,有研究发现SVEP1在乳腺癌、骨肿瘤、肝细胞癌等恶性肿瘤中表达降低,且与肿瘤的恶性程度、临床分期等相关。但是SVEP1在ICC的产生发展中发挥的作用及其具体机制尚不明确,进一步探索SVEP1在肝内胆管细胞癌中的发生发展机制有利于为寻找肝内胆管细胞癌潜在的治疗靶点提供实验依据。本研究以TCGA数据库、GEO数据库、GEPIA、临床样本、ICC患者的临床病理资料及肝内胆管癌细胞株RBE为研究对象,研究了SVEP1在肝内胆管癌癌和癌旁组织内的表达情况,分析了SVEP1和临床病理特征之间的关系及其预后意义;阐释了SVEP1在促进肝内胆管癌增殖、迁移、侵袭和趋化的生物学行为中发挥的作用。研究方法1.SVEP1表达在肝内胆管癌中的临床意义(1)在TCGA数据库中验证SVEP1在不同癌种患者的癌与癌旁组织中的表达情况,分析两者之间表达水平的差异。(2)通过TCGA数据库和GEO数据库分析SVEP1在ICC患者癌组织和癌旁组织中的表达差异。(3)在GEPIA中进一步分析ICC患者癌组织中SVEP1表达水平的高低与患者的无病生存期(DFS)和(OS)的关系。2.在ICC患者临床组织样本中验证SVEP1表达(1)收集5例在天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科行根治性切除的ICC临床患者的手术标本,用Western blot在组织蛋白水平检测SVEP1在ICC患者癌和癌旁组织中的表达情况。(2)收集10例在天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科行根治性切除的ICC患者的手术标本,用RT-PCR在mRNA水平检测SVEP1在ICC患者癌和癌旁组织中的表达情况。(3)免疫组化IHC检测113例ICC患者组织样本SVEP1的表达水平,明确其与患者临床病例特点及生存预后的关系;同时对113例ICC患者进行生存预后分析,明确其术后生存预后的影响因素。同时分析SVEP1表达与ICC患者临床病理特征之间的关系,明确其相关性。3.体外实验:研究SVEP1对ICC细胞生物学行为的影响(1)通过构建SVEP1降表达的质粒,利用慢病毒感染的方法,构建SVEP1稳定降表达细胞系和相应的对照组,用RT-PCR和Western blot验证SVEP1在肝内胆管癌细胞系稳定降表达;(2)用细胞功能实验(平板克隆实验、CCK8实验、划痕实验、Transwell实验)验证SVEP1降表达对细胞增殖、迁移、趋化和侵袭能力的影响。结果1.TCGA数据库显示,SVEP1的表达水平在多种肿瘤中的癌组织内表达水平低于癌旁组织;TCGA和GEO数据库均发现ICC患者的癌组织中SVEP1表达水平低于癌旁组织。进一步分析显示,ICC患者癌组织中SVEP1表达水平与患者的DFS和OS呈正相关。2.Western blot和qRT-PCR检测发现SVEP1在ICC患者临床样本癌组织中的蛋白和mRNA表达水平均低于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化显示SVEP1在ICC患者癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.0001)。癌组织中SVEP1低表达的患者较高表达患者生存预后差(P=0.001)。术前总胆红素(P=0.009)、癌栓(P=0.005)及SVEP1的评分(P<0.001)是影响术后肝内胆管癌患者预后的独立危险因素。癌组织中SVEP1表达与ICC患者的淋巴结转移(P=0.042)和卫星结节密切相关(P=0.041)。3.在RBE细胞中稳定降表达SVEP1后,细胞的增殖、迁移、趋化和侵袭能力增强。结论1.SVEP1在ICC患者癌组织中的蛋白表达和mRNA表达水平均低于癌旁组织中;SVEP1与患者的生存预后呈正相关,并与淋巴结转移和卫星结节密切相关;其在ICC癌组织中低表达。2.术前TBIL、有无癌栓及SVEP1的评分是影响术后ICC患者预后的独立危险因素;其中SVEP1表达与ICC患者的淋巴结转移和卫星结节密切相关。3.降表达SVEP1后可以促进ICC细胞的增殖、迁移、趋化和侵袭能力。