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气单胞菌是健康鱼类肠道微生物区系的正常组成成员,但在环境胁迫下,它可使鱼类患败血症,严重时可导致鱼类的爆发性死亡。虽然对气单胞菌在各种水体中的广泛分布性已达成共识,但对气单胞菌属细菌在水体中,尤其在发病鱼塘中的具体种类及其分布规律缺乏相对全面的认识。本研究从三个败血症发病鱼塘的多个生态位分离了363株疑似气单胞菌,通过16S rDNA-RFLP(限制性片段长度多态性)方法结合对代表性分离株的16S rRNA和gyrB(DNA旋转酶B亚基)基因的序列分析对这些菌株进行了种类鉴定。结果显示,嗜水气单胞菌(A.hydrophila)是鱼类败血症的主要病原,但除病鱼的内脏器官和血液外,它在淡水养殖水体中的分布并不广泛,丰度也不高；维氏气单胞菌(A.veronii)才是在水体中分布最广泛,丰度也较高的气单胞菌种类。加上病原追踪部分分离到的菌株,在淡水池塘中至少存在以下7种气单胞菌:A.hydrophila,A.caviae,A.media,A.veronii,A.jandaei,A.allosaccharophila和A.popoffii,提示池塘是气单胞菌属细菌生存的一个库。
败血症发病池塘中病原性气单胞菌来源于何处?有关这个问题,迄今还没有明确的结论。本研究以病原菌不敏感的两种药物(先锋霉素Ⅵ和杆菌肽)作为双抗,从同一池塘的池水、底泥、水生植物及病鱼与健康鱼的肠道样品中筛选分离气单胞菌,得到134株疑似气单胞菌,通过16S rDNA-RFLP方法结合对gyrB序列的进化分析对它们进行了种类鉴定。将62株嗜水气单胞菌分离株(包括血液分离株和环境分离株)用RAPD和ERIC-PCR扩增后进行谱带比对,发现每条病鱼、健康鱼肠道中均存在与病原性嗜水气单胞菌有相同谱带的嗜水气单胞菌克隆,而水体中其他生态位不存在此类气单胞菌克隆,证实血液中的嗜水气单胞菌来自鱼的肠道。
鱼类病原性气单胞菌的遗传多样性一直无人研究。本研究从六个败血症发病鱼塘的病鱼血液或内脏中分离了52株气单胞菌,均鉴定为A.hydrophila。对它们做RAPD和ERIC的PCR扩增并进行条带分析后发现,同一鱼塘内不同种类的鱼体内存在相同的病原性气单胞菌克隆；相距甚远的发病鱼塘的病原性气单胞菌可能具有相同的遗传背景；封闭的两个鱼塘即使相邻,它们的鱼类致病性气单胞菌在遗传上存在差异。这些结果可能会为鱼病防治提供有益的启示或为鱼类流行病学现象提供合理的解释。