禽流感病毒H7N9和H9N2亚型的分离及致病力研究

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2013年3月,中国突然爆发H7N9禽流感病毒,经WHO报道至2014年10月2日人感染453例,其中175例死亡。2013年4月从杭州余杭某五杭农贸市场的鸡中分离出来一株H7N9病毒株,命名:A/Chicken/Zhejiang/YH/2/2013(H7N9)。从8个基因片段的最近相似度和进化树分析来看,属于低致病性禽流感病毒重组,与2013年其它地区分离出来的的H7N9相似度高。与生物学特性有关的特殊氨基酸分别在HA的138、160、186,M1的30位和NS1的42位发生突变。该毒株的IVPI为0.66,属于低致病性禽流感病毒。42日龄和60日龄的SPF鸡致病性实验结果显示,临床病征不明显,仅有少数鸡发生死亡。咽肛拭子病毒分离率在雏鸡接毒后第3天达到最高,咽肛拭子的分离时间均为1周。同居感染鸡的咽肛拭子在感染后2-7天可以分离出来病毒。存活的感染鸡只有在第7天的肺脏和肾脏中分离出病毒,病死鸡解剖可见气管出血。HE结果显示气管黏膜炎性细胞侵润,肺泡出血,肺泡结构消失,脾小织结构紊乱。A/Chicken/Zhejiang/YH/2/2013(H7N9)在鸡胚上随着传代次数的增加,EID50逐渐升高但血凝价变化不明显,不同代次病毒HA基因片段检测并未发现氨基酸的突变。  H9N2亚型禽流感在我国的鸡群中引起鸡呼吸道疾病及产蛋率下降,与其他病原共感染时常导致鸡群的高死亡率,严重制约我国家禽业的发展。在分离病毒H7N9病毒的同时,从杭州滨江某农副商行活禽市场中分离出来一株鹌鹑源的H9N2病毒,命名为A/Quail/Zhejiang/HZ/1/2013(H9N2),IVPI为0.36。基因组的序列显示,氨基酸序列HA蛋白的裂解位点为PSRSSRGL为低致病性禽流感特征。HA的226位出现人流感病毒结合位点Leu,NS1基因出现了42S和149A的突变,M2基因出现了S31N的突变。遗传进化分析显示:HA基因、NA基因、NS基因属于CK/BJ/1/94谱系,M基因和PB2基因属于G1/97谱系,NP基因、PB1基因、PA基因属于CK/SH/F/98谱系。6周龄雏鸡的致病力实验表明,该毒株感染鸡无明显的临床症状,感染鸡在第3天咽肛拭子的检测阳性率最高,而后逐渐降低,在第11天只能检测到少量的咽肛拭子阳性,21天的血清效价100%转阳,HI效价达到29;同居感染的鸡感染率达到100%,感染后排毒时间达到5天。感染后第3、5、7天解剖鸡只除个别鸡出现气管环出血外,无特别的病变特征。HE染色显示肺脏有炎症和组织结构变化。
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