骨肉瘤是青少年恶性骨肿瘤中最常见的一种,具有患者低龄化,致残率高和性别差异等特点,目前能够有效治疗骨肉瘤的药物并不常见,临床上多采用阿霉素、长春新碱、顺铂等化疗药物,然而这些化疗药物具有副作用大,预后差,易复发,易耐药等缺点,因此对于骨肉瘤治疗的创新药物研究十分重要。鹿茸是我国具有悠久历史的名贵药材,是哺乳动物唯一可再生的器官,含有丰富的氨基酸、生长因子、磷脂等有效成分,在治疗骨折、骨质疏松、提高免疫力以及治疗肝肾疾病具有良好的效果,也有研究发现鹿茸对于肿瘤疾病也具有一定的作用。随着技术的发展,研究人员开始对鹿茸的有效成分进行提取,获得了包括鹿茸多肽、鹿茸胶原、鹿茸蛋白水解肽等有效成分,并对其进行了药理活性的研究,取得了众多研究成果,为鹿茸多肽的应用奠定了坚实的基础。本文采用的鹿茸多肽是本课题组前期获得的,其氨基酸序列为VLSATDKTNVLAAWGKVGGNAPAFGA EALERM。利用MTT方法检测鹿茸多肽对骨肉瘤细胞增殖的影响,将浓度为0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μg/ml的鹿茸多肽作用于骨肉瘤细胞MG-63和U2OS,分别作用24 h、48 h和72 h,实验结果表明从2.5μg/ml开始鹿茸多肽能够显著的抑制骨肉瘤细胞MG-63和U2OS的增殖(p<0.01),并随着时间和浓度的升高,作用更加显著。通过0、20、80μg/ml鹿茸多肽作用于细胞划痕,24小时后对划痕进行测量,并与0 h时的初始划痕宽度对比,计算出骨肉瘤细胞的迁移距离和迁移率。结果显示加入鹿茸多肽的实验组细胞迁移距离明显小于空白对照组(p<0.05),实验表明鹿茸多肽能够显著的抑制骨肉瘤细胞的迁移。通过western blot和qPCR检测骨肉瘤细胞的EMT和凋亡的相关蛋白和基因的变化,发现鹿茸多肽能够显著抑制MG-63中TGF-β1的表达,并且抑制MG-63细胞凋亡和EMT的发生,同时鹿茸多肽能够促进U2OS中TGF-β1的表达,同时促进U2OS细胞的凋亡和EMT的发生。对两种细胞进行TGF-β1沉默后发现MG-63和U2OS细胞的TGF-β1的表达均显著下降,并且两种细胞的凋亡和EMT均被抑制,可以得出TGF-β1是鹿茸多肽调控骨肉瘤细胞的关键因子,鹿茸多肽能够通过干预TGF-β信号通路对骨肉瘤细胞的凋亡和EMT过程进行调控。此外鹿茸多肽对两种骨肉瘤细胞TGF-β1表达的影响是不同的,进而导致鹿茸多肽对两种细胞凋亡和EMT的调控作用不同,这可能是由于MG-63和U2OS细胞的细胞类型不同所致,其作用机制需进一步探究。