高通量结构基因组学技术平台的建立及DFF45和线虫原肌球调节蛋白的晶体学研究

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为了建立结构基因组学研究规模化和自动化操作的技术平台,54个与人类疾病相关基因被选择出在结构基因组学研究中平行地进行基因克隆、蛋白表达纯化和晶体生长.这些基因选择的标准是产物蛋白分子量在14-50kDa之间,蛋白序列中所含疏水性氨基酸残基较少,所选的基因其产物蛋白的晶体结构未知,所选基因产物蛋白不是蛋白复合体的亚基.此外,四个基因的编码蛋白含有穿膜肽,六个所选择的基因同白血病相关,这六个基因都未知其蛋白的晶体结构.实验结果表明,有44个基因被成功地克隆为Gateway克隆表达系统的表达克隆,35个基因可以在大肠杆菌中表达得到重组蛋白,其中13个是可溶性蛋白,四个可溶性蛋白被纯化出来用于96孔板油覆盖坐滴法筛选蛋白晶体生长条件,两个蛋白生长得到了晶体,一个蛋白晶体用油覆法做进一步的优化得到了可以衍射的晶体的衍射分辨率可以达到2.12A.结果表明Gateway大肠杆菌表达系统和96孔板油覆盖坐滴法适合于结构基因组学研究.
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