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目的: 1.探讨实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术同时检测移植患者HCMV-DNA和BKV-DNA载量的临床实用价值。 2.初步探讨以移植患者体内HCMV或BKV病毒载量为指标评估个体免疫状态的可行性,为临床治疗提供参考依据。 方法: 1.随机留取2009年1月至2010年6月期间在我院随访的314例移植患者592份外周血标本,采用Real-time PCR技术同时检测标本DNA中HCMV和BKV病毒载量,分析HCMV和BKVDNA血症阳性率以及病毒载量的分布情况,评价此方法的可行性和临床实用价值。 2.收集来自2009年10月至2010年9月在我院随访的移植患者603份外周血标本,采用ELISA法检测每份血标本他克莫司浓度,并检测其中540份血标本的生化指标,分析他克莫司血药浓度与HCMV或BKV感染及患者肝功能或肾功能指标的关系,评价以移植患者体内HCMV或BKV病毒载量为指标评估个体免疫状态的可行性和临床意义。 结果: 1.314例移植患者共检测到HCMV-DNA阳性106例(33.76%),BKV-DNA阳性65例(20.70%),前者阳性率高于后者(P=0.000)。肾移植患者HCMV-DNA和BKV-DNA阳性率分别为36.78%和21.90%;肝移植患者HCMV-DNA和BKV-DNA阳性率分别为24.70%和16.40%。病毒载量以低拷贝数(1×103 copies/ml)为主。 2.314例移植患者双重病毒DNA(+)者为33例(占10.51%),其中肾移植30例(12.40%),肝移植3例(4.11%)。592份全血标本出现HCMV-DNA和BKV-DNA同步阳性总共有33例(占5.57%)。HCMV-DNA(+)组BKV-DNA阳性率为22.45%(33/147),HCMV-DNA(-)组BKV-DNA阳性率为10.11%(45/445),阳性组BKV-DNA阳性率高于阴性组(P<0.05);而BKV-DNA(+)组HCMV-DNA阳性率为42.31%(33/78),BKV-DNA(-)组HCMV-DNA阳性率为22.18%(114/514),前组HCMV-DNA阳性率高于后组(P<0.05)。提示两种病毒可能存在相互激活作用。 3.BKV或HCMV DNA(+)者,其TAC血药浓度比BKV或HCMV DNA(-)者较高(P值为0.030和0.049),表明病毒DNA血症与免疫抑制剂的使用量有关,肾移植病人HCMV-DNA血症与TAC药物的关系尤为显著(P=0.027)。 4.免疫抑制剂TAC使用量越大,病毒DNA血症发生的风险则越高,当TAC血药浓度在超过5.00ng/ml以后,病毒感染风险明显增加。HCMV-DNA血症表现尤为显著,高浓度组和低浓度组HCMV DNA阳性率分别为31.25%和22.47%(P=0.029),在肾移植患者中表现更加明显。 结论: 1.Real-time PCR能够直接检测到全血中HCMV和BKV病毒载量高低,而且同时检测HCMV和BKV效果良好,可行性强,且有经济、快速、省力等优点。 2.使用免疫抑制剂TAC的移植患者术后易出现BKV和HCMV病毒DNA血症,BKV和HCMV感染程度与TAC血药浓度相关。另外,病毒载量在一定程度上反映服用TAC患者的免疫抑制程度,可能是评估个体免疫状态的一个有效指标。