目的:研究快速生长期鹿茸提取物对软骨细胞的调控作用及相关生物学机制方法:用匀浆、低温浸提和冷冻干燥的方法制备快速生长期鹿茸提取物。利用同位素标记技术和质谱鉴定技术对初生期、快速生长期和骨化期鹿茸顶端生长组织进行蛋白质组研究,结合生物信息学分析方法,对蛋白质组数据库进行差异表达蛋白筛选分析,及相关功能注释。利用CCK-8法和阿利新蓝染色法,对快速生长期鹿茸提取物对软骨细胞的调控作用进行研究。利用高通量RNA-seq技术建立鹿茸提取物(DAE)作用后原代软骨细胞的转录组数据库,结合生物信息学分析方法,对转录组数据库进行差异表达基因分析,及相关功能注释。结果:(1)快速生长期鹿茸提取物(DAE)平均收率达2%,DAE中蛋白质含量达70%。(2)对鹿茸快速生长期相对于初生期表达量显著上调的活性蛋白进行了深入分析,它们中主要包括参与血液循环及软骨细胞生长发育的相关活性蛋白;针对快速生长期鹿茸相对于骨化期鹿茸表达量显著性上调的差异蛋白进行深入分析发现,这些差异蛋白主要为参与循环系统和氧气运输、神经生长和再生、软骨和骨组织发育及ATP合成的相关蛋白。(3)CCK-8实验结果表明,DAE能够以剂量依赖的方式促进软骨细胞增殖,在药物浓度为0.64mg/ml和1.28mg/ml是作用效果最明显且作用效果基本相同。阿利新蓝染色实验验证了DAE对软骨细胞增殖的促进作用,且最适给药浓度和CCK-8实验结果一致。(4)构建了DAE作用的小鼠原代软骨细胞转录组数据库,通过生物信息学分析,共鉴定出639个差异表达基因,DAE处理组显著上调基因有365个,显著下调基因有274个。(5)对差异表达基因进行筛选分析,从表达量显著上调的基因中筛选出促进细胞增殖的差异表达基因(Dbf4、Usp3、E2f等),参与氧化应激(MT2、MT1、SOD3等)、炎症反应(Ptpn2、Relb、S1pr3等)和免疫应答(Lbp、C1ra、C1sa等)的差异表达基因。从表达量显著下调的基因中,我们筛选出了有关软骨细胞分化调控的相关基因(Lect1、Tgfβ3、Sfrp1等)。(6)Q-PCR实验结果与转录组测序结果一致,证明转录组测序结果真实可信。结论:快速生长期鹿茸顶端生长组织中含有大量参与血液循环、氧气运输、神经生长、软骨细胞增殖、ATP合成的相关活性蛋白成分,这些蛋白的高表达使得快速生长期的鹿茸具有最高的品质。快速生长期鹿茸提取物能够以剂量依赖的方式促进原代软骨细胞增殖,作用机制是显著提高软骨细胞的增殖活性,同时抑制软骨细胞的肥大、分化,DAE还能够提高软骨细胞抗氧化、抗炎和免疫应答能力。