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睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)的紧密连接蛋白(claudins,CLDNs)在精子迁移过程中扮演着开关的角色。为探索CLDNs对牦牛(Bos grunniens)SC的生物学作用,本研究获取牦牛CLDN3基因序列,对其进行生物信息学分析,并检测FSH对SCs CLDN3、CLDN11表达的影响。扩增CLDN3基因序列,测序并拼接,用生物信息软件分析牦牛CLDN3 m RNA特征。运用实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测FSH对牦牛SCs CLDN3 m RNA、CLDN11 m RNA表达的影响。通过免疫蛋白印记(Western bloting,WB)方法,检测FSH对牦牛SCs CLDN3蛋白、CLDN11蛋白表达的影响,并采用免疫荧光染色对CLDN3蛋白、CLDN11蛋白进行定位检测。结果表明:(1)本研究成功克隆得到1074 bp含有开放阅读框的牦牛CLDN3 c DNA序列(Gen Bank No.YK 411920),其中编码区660 bp,编码219氨基酸,经同源性分析发现牦牛与其他物种同源性较高(≥90%)。(2)FSH浓度为25 ng/m L时CLDN3 CLDN11 m RNA表达与其他组相比表达水平最高,差异极显著(p<0.01)。(3)25 ng/m L FSH作用2h CLDN3 m RNA和蛋白水平与其他组相比表达水平最高差异极显著(p<0.01);25 ng/m L FSH作用24 h时CLDN11 m RNA(p<0.01)和蛋白水平与其他组相比表达水平最高。(4)免疫荧光结果显示CLDN3蛋白在SCs细胞质、细胞核及细胞膜均有表达,CLDN11在SCs细胞质、细胞膜均有表达。综上所述,牦牛CLDN3氨基酸序列在种属间具有保守性,FSH可能是牦牛SCs形成TJ的重要激素,并以浓度依赖和时间依赖的方式影响CLDN3、CLDN11的表达。本研究为揭示牦牛精子迁移过程中CLDN3、CLDN11的生物学作用提供科学依据。