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雷帕霉素是一种具有抗真菌活性的大环内酯类物质。通过雷帕霉素对灰葡萄孢菌拮抗实验,确定了雷帕霉素的抗真菌特性;通过对雷帕霉素作用靶标蛋白的相关基因的克隆,获得了灰葡萄孢菌BcFKBP基因和BcTOR基因的cDNA序列;利用RNA干扰技术,获得了BcTOR基因的沉默菌株并进行了初步功能探究。本研究获得结果主要如下:1.测定了雷帕霉素对灰葡萄孢菌WY、油菜菌核病菌、水稻纹枯病菌、棉花枯萎病菌四种植物病原真菌的抑菌活性并得到各自的毒力方程及EC50:对灰葡萄孢菌的毒力方程为y=7.9875+1.0356x,EC50为(0.0013±0.0002)μg/mL;对油菜菌核病菌的毒力方程为y=8.8158+1.0127x,EC50为(0.0002±0.0001)μg/mL;对水稻纹枯病菌的毒力方程为y=8.0036+1.2529x,EC50为(0.0040±0.0004)μg/mL;对棉花枯萎病菌的毒力方程为y=7.8462+1.1748x,EC50为(0.0038±0.0006)μg/mL。2.比较了雷帕霉素和一般化学农药对灰葡萄孢菌WY的抑制效果,结果表明:雷帕霉素对灰葡萄孢菌WY菌丝生长的抑制效果显著高于嘧菌酯和丙烷脒,其EC50分别为嘧菌酯的1/2490、丙烷脒的1/2930。3.研究了不同氮源条件下,雷帕霉素对灰葡萄孢菌WY的抑菌效果,结果表明:雷帕霉素对以硝态氮、铵态氮、尿素为唯一氮源的基础培养基上的灰葡萄孢菌WY生长抑制差异不显著,但与谷氨酸、PDA为氮源的培养基上相比生长抑制差异显著。4.显微观察发现,灰葡萄孢菌WY经雷帕霉素处理后,菌丝表现出生长受到抑制和提前衰老的症状;有趣的是,雷帕霉素不影响孢子萌发。5.对雷帕霉素作用靶标蛋白的相关基因的克隆,获得了灰葡萄孢菌WY的FKBP基因的两个cDNA序列(BcFKBP-1,615bp;BcFKBP-2,1413bp)和TOR基因的一个cDNA序列(BcTOR,7296bp)。6.获得了雷帕霉素靶标TOR基因的干扰载体,并经根癌农杆菌介导得到三株有潮霉素抗性的沉默菌株Bc_TH94a、Bc_TH94c、Bc_TH94d,对TOR基因的沉默率分别为51.1%、34.3%、40.7%。进一步研究表明,相对于野生型菌株Bc_WY,沉默菌株在平板上的菌丝生长速率降低,生长速率抑制率分别为39.34%、51.18%、74.27%,且在不同氮源基础培养基上菌丝生长速率也有差异;相对于野生型菌株Bc_WY,沉默菌株对草莓叶片、草莓果实和番茄果实的致病能力有所下降。