秋鼠麴草有效成分提取、分离及指纹图谱研究

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本论文对近年来国内外学者研究较多的、具有镇咳祛痰、抗氧化、杀虫、抗炎、抑菌等药理活性的秋鼠麴草高效液相色谱指纹图谱进行了详细研究,并对其化学成分进行了提取、分离和结构鉴定,其主要研究内容如下:  1、秋鼠麴草花和叶HPLC指纹图谱的建立。首先,通过单因素实验和正交实验考察了提取方式、料液比、溶剂浓度、提取时间以及提取次数对提取率的影响。获得的花部分最佳提取条件为:超声辅助提取,料液比1∶30,提取时间为40min,功率300W,乙醇浓度60%。其次,考察流动相、洗脱程序以及检测波长对色谱分离的影响,获得的花部分的最佳色谱分离条件为:流动相0.01%三氟乙酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0~40min,10%~20%;40~50min,20%;50~60min,20%~25%;60~80min,25%;80~110min,25%~40%;110~130min,40%。叶部分的最佳色谱分离条件为:流动相0.01%-氟乙酸(A)-乙腈(B);梯度洗脱:0~40min,5%~19%;40~50min,19%;50~60min,19%~24%;60~80min,24%;80~110min,24%~39%;110~135min,39%。第三,采用反相高效液相色谱法(HPLC),利用二元梯度洗脱模式,研究了不同地方秋鼠麴草花部分和叶部分的指纹图谱,通过相对保留时间和峰面积的计算,确定了花部分的15个共有峰和叶部分的12个共有峰,并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件2004A版拟合了10批秋鼠麴草花部分和叶部分的指纹图谱,计算出各色谱图的整体相似度。该方法准确,重现性好,适用于秋鼠麴草药材的质量控制与真伪的鉴定。  2、秋鼠麴草花部分正丁醇萃取物中有效成分的分离、纯化与鉴定。首先收集在不同淋沈剂下D101大孔吸附树脂、硅胶层析柱的洗脱液,再通过薄层色谱点板,合并相同的组分,最后采用LC或LC-MSn来分离检测和鉴定各成分。结果表明:当使用硅胶柱并采用石油醚-乙酸乙酯9∶1(v/v)为淋洗剂时,所收集的洗脱液的成分与过大孔树脂淋洗剂为80~90%乙醇水溶液的洗脱液成分基本相同,合并两部分洗脱液,点板,展开剂为氯仿:甲醇9∶1(v/v)时,可见有两个明显的斑点,将第一个斑点刮下,得物质Ⅰ,经高效液相检测纯度达95.65%,根据相对保留时间、质谱数据、标准品对照以及核磁图谱推断出该化合物为芹菜素;将淋洗剂为石油醚-乙酸乙酯4∶6(v/v)部分的洗脱液直接点板,刮下第二个斑点,得物质Ⅱ,经过高效液相检测纯度为92.84%;另外,直接取花部分正丁醇萃取物点板,采用氯仿:甲醇9∶1(v/v)为展开剂,刮下薄层色谱板下部黄色带,用甲醇洗脱提取,洗脱液经过制备型高效液相色谱纯化获得物质Ⅲ和Ⅳ,再经分析型高效液相色谱检测纯度分别为97.45%、79.93%;除此之外,物质Ⅴ、Ⅵ及Ⅶ的结构则通过HPLC-MS(ESI-MS)检测得质谱数据与标准样品对照的质谱数据和相对保留时间对照,推出它们的可能结构为金丝桃苷、木犀草素-4’-D-葡萄糖苷和槲皮素。
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