论文部分内容阅读
卵转铁蛋白(OVT)是禽蛋蛋清蛋白中主要的成分,具有多种生物活性。OVT通过抗原递呈细胞进行外来物质(抗原)的吞噬处理和递呈作用,传递信息给免疫细胞,激活机体的先天性免疫系统,调节免疫细胞因子的产生,影响淋巴细胞增殖、T细胞的成熟与分化,在生物体内发挥着增强免疫功能、抵抗细菌和病毒感染的作用。树突状细胞(DCs)作为体内最强的抗原提呈细胞,能够将细胞内外抗原特异性呈递给幼稚型T细胞,引发机体免疫反应。目前尚未见OVT对DCs发育、成熟、迁移及免疫调节分子等的影响报道。本文通过体外培养小鼠骨髓来源树突状细胞,流式细胞仪检测不同浓度OVT刺激下DCs表面特征性分子表达量,ELISA测定细胞培养上清液中细胞因子水平变化,MLRs测定成熟DCs引发同种异体小鼠脾脏T细胞增殖效果,Western-blot测定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及它们的磷酸化蛋白含量,探讨OVT对DCs成熟和免疫调节的影响,为后续的试验提供理论依据。研究结果如下:(1)不同浓度(10、25、50、100、200μg/mL)OVT单独刺激DCs 48 h后,均能显著提高DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表达量,促进DCs的成熟;不同浓度OVT与LPS共同刺激DCs 48 h后,10~25μg/mL(低浓度)OVT刺激的DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表达量显著高于阳性对照组(LPS单独刺激组),表现为协同LPS刺激效果,25~200μg/m L(高浓度)OVT刺激的DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表达量显著低于阳性对照组,表现为拮抗LPS刺激效果。因而,OVT单独刺激或与LPS共刺激DCs均表现出促进DCs成熟的效果,但共刺激下高浓度会减弱DCs的成熟度。(2)不同浓度OVT单独刺激成熟的DCs均能够引发同种异体小鼠脾脏T淋巴细胞增殖,不同浓度OVT在DCs:T细胞=1:25时,T细胞增殖率最高;LPS与不同浓度OVT共同刺激成熟的DCs在低浓度OVT时能显著引发T细胞增殖,但高浓度OVT对T细胞的增殖无显著影响。以上结果表明,OVT单独刺激或低浓度与LPS共刺激成熟的DCs显著引发T淋巴细胞增殖,但高浓度共刺激DCs无引发T细胞增殖的能力。(3)不同浓度OVT单独刺激DCs 48 h后,DCs培养上清液中TNF-α含量随浓度增加而升高,但在200μg/mL时,显著下降;IL-10的表达量在200μg/m L时达到最大;IL-12p70的表达量不依赖OVT的剂量,在细胞上清液中大量存在,且与对照组无显著差异,表明OVT单独刺激下促炎反应占主导,在浓度最高时抗炎反应起主导作用,抑制炎症的继续发展,但IL-12p70的表达量呈现不依赖OVT浓度。(4)LPS与不同浓度OVT共刺激DCs 48 h,细胞上清中TNF-α含量呈现先升高后下降的趋势,25μg/m L OVT为转折点。IL-10含量随OVT浓度增加上调,在OVT浓度为200μg/m L时达到最大,共刺激DCs产生的IL-12p70显著高于单独刺激各组,但共刺激组别间无显著差异。表明OVT与LPS共刺激下低浓度时主要发生促炎反应,高浓度时抗炎反应占主导地位且依赖OVT浓度,IL-12p70总体呈现不依赖共刺激物,但显著高于OVT单独刺激组的释放量。(5)25μg/m L OVT单独刺激DCs一定时间(4 h、8h、12 h)后,检测MAPK信号路径下的p38MAPK、ERK、JNK及它们的磷酸化蛋白表达量,结果表明:OVT单独刺激DCs时,ERK、p-ERK表达量下调,p-p38MAPK、JNK,p-JNK表达量上调,揭示OVT单独刺激DCs的成熟依赖p-p38MAPK、ERK和JNK路径;LPS与25μg/mL OVT刺激DCs后,DCs内p38MAPK、p-p38MAPK、JNK和p-JNK表达量上调,ERK蛋白和p-ERK蛋白表达量下调,表明LPS与OVT共刺激DCs的成熟依赖p38MAPK、JNK和ERK三条路径。