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前列腺癌(prostate cancer,PCa)是男性最常见的泌尿系肿瘤之一。目前主要的治疗方法有:根治性手术治疗、放射治疗及内分泌治疗等。早期临床局限性前列腺癌通过根治性手术或放射治疗可以治愈,而中晚期进展性前列腺癌目前主要以内分泌治疗为主。接受内分泌治疗的患者,大多数起初有效,但几乎都将逐渐发展为激素非依赖性前列腺癌或激素难治性前列腺癌,预后不佳。因此,揭示前列腺癌进展中的分子机制已成为国内外研究的热点。B7-H3是近年来发现的一个共刺激分子B7家族新成员,研究表明其在前列腺癌组织中异常高表达,并且与肿瘤的临床病理特征之间存在显著负相关性。但B7-H3在前列腺癌进展中的作用机制仍不清楚。本研究首先检测并分析了B7-H3在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达情况。然后设计并体外化学合成了7条siRNA,鉴定并筛选出最有效的siRNA。利用此siRNA体外沉默B7-H3基因,研究该分子对前列腺癌细胞株PC-3细胞生物学行为的影响及可能机制。本研究分三个部分:第一部分前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3分子的表达目的:检测前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3分子的表达水平。方法:分别收集13例前列腺癌及19例前列腺增生组织标本,运用免疫组织化学( immunohistochemistry , IHC )染色法及酶联免疫吸附法( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行检测,并进行统计学分析。结果:免疫组织化学染色结果显示,前列腺癌组织中的B7-H3表达水平显著高于前列腺增生组织(p=0.0002)。在7例前列腺癌组织切片中可以看到B7-H3染色阳性细胞数大于50%。4例前列腺癌以及5例前列腺增生组织切片B7-H3染色阳性细胞数在25~50%之间。2例前列腺癌以及14例前列腺增生组织切片B7-H3染色阳性细胞数小于25%。ELISA检测结果显示,前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3分子水平分别为174.73±56.80、82.69±46.19ng/g,两者差异具有显著性(p<0.001)。结论:B7-H3蛋白在前列腺癌组织中的表达显著高于前列腺增生组织,并首次定量分析了B7-H3蛋白在前列腺癌组织中的表达水平,得出了具体的参考值。第二部分靶向人B7-H3基因有效siRNA序列的筛选及效果检测目的:设计、合成靶向B7-H3基因的siRNA序列,并筛选出最有效的序列,为后续研究提供依据。方法:针对人B7-H3基因mRNA序列设计并化学合成7条siRNA及两条阴性对照序列。转染后6小时荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测转染效率。转染后24小时逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测各组PC-3细胞B7-H3 mRNA表达水平,筛选出有效序列。实时定量PCR(Real-time PCR)及流式细胞仪(flow cytometry,FCM)于转染后24、48、72小时检测所筛选出的有效干扰序列对PC-3细胞B7-H3 mRNA及蛋白表达的抑制效率。结果:转染后6小时,转染效率超过80%。B7-H3-4 siRNA在转染后72小时内能有效抑制B7-H3 mRNA表达及蛋白表达,抑制率达60%。结论:筛选到一条干扰效果较佳的B7-H3 siRNA干扰序列,为进一步研究B7-H3生物学功能奠定了基础。第三部分: B7-H3膜分子对人前列腺癌细胞株PC-3生物学行为的影响目的:利用B7-H3-4 siRNA沉默B7-H3基因,探讨B7-H3对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法:实验分为三组:空白对照组B(不转染组);阴性对照组NC(NC siRNA组);实验组(B7-H3-4 siRNA组)。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞生长率,绘制生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期;Annexin V/PI双染色法测量细胞凋亡率;基质-细胞粘附实验检测细胞粘附能力;划痕实验检测细胞水平迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力。对所有数据进行统计学分析。结果:(1)MTT法检测结果显示:转染后24、48、72小时四个时间点空白对照组、阴性对照组OD值稍高于实验组,但无统计学差异(p均>0.05)。(2)细胞周期检测结果显示:转染后48小时,空白对照组、阴性对照组及实验组细胞周期分布无显著差异(p均>0.05)。(3)细胞凋亡率检测结果显示:转染后48小时,空白对照组、阴性对照组及实验组PC-3细胞凋亡率分别为:2.8±0.5%、2.6±0.4%、2.6±0.3%,无显著统计学差异(p>0.05)。(4)细胞粘附实验结果显示:实验组细胞粘附能力显著低于空白对照组、阴性对照组(p均<0.01)。(5)划痕实验检测结果显示:划痕后12、18、24小时,实验组划痕相对宽度显著大于空白对照组及阴性对照组(p均<0.05)。(6)侵袭实验结果显示:实验组过膜细胞数显著少于空白对照组及阴性对照组(p均<0.01)。结论:(1)沉默B7-H3基因对PC-3细胞的生长率、凋亡率及周期分布无显著影响;(2)B7-H3基因沉默能明显抑制PC-3细胞的粘附、迁移、侵袭能力。