MicroRNA表达异常在急性髓细胞白血病耐药机制中的作用研究

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目的:分析miRNA-98的表达异常在急性髓系白血病化疗耐药机制的作用,通过靶向过表达miRNA-98的表达水平探讨以miRNA-98为靶点增加化疗药物敏感性的可能性并分析其可能作用的机制。评价异常表达的血清miRNA-155是否可作为急性髓系白血病的预后标志。  方法:离体实验中,采用qRT-PCR方法检测K562和其耐药株K562/A02中miR-98、E2F1基因表达情况。通过瞬时转染miR-98 mimic处理耐药细胞K562/A0248h后,通过qRT-PCR法检测miR-98表达情况;通过qRT-PCR和Western blot方法检测E2F1表达的变化,应用CCK8方法检测耐药细胞的IC50及增殖抑制的情况。并分析转染miR-98 mimic后,MMP-9、ABCG2、p21、BAX蛋白表达情况。在体实验中,通过qRT-PCR的方法检测miRNA-155在健康人、初诊患者、耐药复发患者和完全缓解患者血清中的表达水平,并对初诊患者进行12个月的随访,分析其中未缓解者和完全缓解者miRNA-155的变化。  结果:离体实验中,miR-98在急性髓系白血病耐药株的表达水平低于其亲本细胞株;耐药细胞株E2F1和ABCG2的表达高于亲本细胞株。上调急性髓系白血病耐药细胞株中的miR-98的表达,可以增加细胞对阿霉素的敏感性和减少细胞的增殖。通过应用生物信息学我们发现E2F1为miR-98的靶基因,经RT-PCR和western blot证实E2F1为miR-98的直接靶基因,随后在对其机制的研究中还发现上调miR-98后MMP-9、ABCG2表达下降,p21、BAX表达增加。在体实验中,miRNA-155在初诊组患者中的表达明显高于健康对照组,耐药复发患者组miRNA-155明显高于完全缓解组。在对初诊组患者进行12个月随访后发现未完全缓解者的miRNA-155的表达水平明显高于完全缓解者。  结论:miRNA-98可能通过下调E2F1、ABCG2等相关蛋白的表达增加AML对化疗药物的敏感性。并且血清miRNA-155可作为AML耐药的标志物,用于评价患者的预后。
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