一、研发背景　　 利可君是一种典型的噻唑羧酸类抗癌升白药物，对白细胞有促进增生作用，可广泛用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症、再生障碍性贫血等，特别是癌瘤的放射治疗和化学治疗引起的白细胞减少症。临床用于血小板减少及再生障碍性贫血也具有一定疗效，无明显不良反应，受到广大患者和医务人员的欢迎。利可君作为化药在俄罗斯首次上市，而在韩国、巴西、印尼等国上市的利可君属于重组蛋白类。国内自1963年首次上市以来，该药物发展迅速，至今已有许多厂家仿制。南京长澳医药科技有限公司成功研制出具有自主知识产权的六类化药利可君，本文根据《化学药仿制药研究技术指导原则》，对利可君原料药质量控制及药代动力学进行了初步研究，为临床研究提供参考依据。　　 二、原料药的质量控制研究　　 建立利可君的HPLC、GC检测方法。HPLC法:采用DiamonsilC18(4.6mm×250mm，5μm);流动相:2mmol/L磷酸二氢钾（含0.15％醋酸）—乙腈(62:38)，流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长210nm。结果:主峰与相邻杂质峰分离度良好，利可君在0.01～0.5mg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9995，最低检测限为0.5μg·mL-1。结论:该法简便、准确，灵敏度高，专属性强，可以用于利可君的有关物质测定。　　 GC有机溶剂检查:用安捷伦DB-624(30m×0.32mm×1.8μm)毛细管柱，采用程序升温40℃(维持10min)，再以50℃·min-1的速率升到180℃(维持5min);进样口温度150℃;氢火焰离子化检测器(FID)温度200℃;流速1.0mL·min-1;载气为高纯氮气;分流比30∶1。外标法计算残留溶剂的含量。结果:各溶剂峰均能达基线分离。结论:该法简便、准确，灵敏度高，专属性强。　　 三、药物代谢动力学研究　　 建立测定大鼠血浆中利可君浓度的LC-MS方法。方法:取SD大鼠48只随机分组，分别单剂量静注（1mg·kg-1）和灌胃(5、10、20mg·kg-1)的利可君，按不同时间点采血，血浆样品经高氯酸沉淀后进行LC-MS测定。色谱条件:色谱柱为AgilentZorbaxEclipseplusC18(150mm×3.9mmID，5μm)，流动相为乙腈-水-冰醋酸(20∶80∶0.3)，质谱条件:电喷雾离子化(ESI)方式，选择性正离子方式检测，利可君和内标替硝唑的选择检测离子质荷比分别为m/z=296.1([M+H]+)和m/z=248.1([M+H]+)。结果:利可君的线性范围为48～30000ng·mL-1(r=0.9993)，最低定量限(LLOQ)为48ng·mL-1。高、中、低3种浓度的批内和批间变异均小于15％;绝对回收率在84.64％～90.55％;相对回收率在92.67％～110.910％。符合生物样品分析要求。结论:本法专属性强、灵敏度高、线性关系良好，操作简便，适用于药代动力学研究。