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胶原蛋白是一类由三条a多肽链组成的三聚体大分子,广泛存在于动物体中,是生物体内重要的结构蛋白,在维持组织机械稳定性和细胞发育以及抗氧化等方面有着极其重要的作用。由于胶原蛋白独特的结构和性能,目前已在很多领域有广泛应用。通过基因工程方法生产的胶原蛋白因其具有水溶性、低免疫原性、无病毒隐患等特点,已成为研究的热点并得到广泛的应用。本研究以含有类人胶原蛋白基因COL6A2全部序列的重组质粒pCMV-SPORT6-COL6A2为模板,自行设计引物,通过PCR技术扩增得到目的基因COL6A2。利用双酶切法连接目的基因和原核表达载体pET32a,并将其转化到大肠杆菌DH5α中构建重组表达载体pET32a-COL6A2,筛选阳性克隆进行PCR和双酶切鉴定后进行测序。将成功构建的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21(DE3)、BL21(DE3)plysS、 Rosetta(DE3)中,利用IPTG诱导表达重组胶原蛋白,将诱导培养得到的菌体经12%SDS-PAGE电泳检测分析,从中筛选出表达量最高菌株作为工程菌株并对重组质粒的稳定性进行检测。利用超声波法对诱导后菌液进行细胞破碎处理,将冷冻离心后的上清和沉淀进行SDS-PAGE电泳检测,分析重组蛋白的可溶性。通过单因素和正交试验确定重组菌表达重组胶原蛋白的最佳发酵培养条件。利用Ni Sepharose6Fast Flow亲和层析纯化重组胶原蛋白,以12%SDS-PAGE检测其纯度,并做冻干处理。分别以其总还原力及其对DPPH、超氧阴离子、羟基自由基的清除率为指标,对重组胶原蛋白体外抗氧化能力进行研究。结果：通过PCR获得与目的基因大小一致的条带,约570bp；经PCR、双酶切及测序鉴定,得到了与目的基因序列一致的正确重组质粒pET32a-COL6A2; SDS-PAGE电泳检测诱导后重组蛋白并分析,获得与预期蛋白大小相同的目的条带,重组蛋白分子量约为30kD,并筛选出大肠杆菌BL21(DE3)为高效表达菌株,表达量为23.9%；对其传代后菌体蛋白进行分析显示重组蛋白表达量没有明显变化,说明质粒稳定遗传；可溶性结果分析显示,重组胶原蛋白为可溶性蛋白,大部分以可溶蛋白形式存在；通过正交试验确定最佳发酵培养条件为：pH7、接种量1%、温度28℃、OD600=0.8、IPTG浓度1.0mmol/L、诱导时间7h,此时重组胶原蛋白表达量为34.2%；Ni Sepharose6Fast Flow亲和层析纯化后获得了纯度在90%以上的目的蛋白；重组胶原蛋白的体外抗氧化实验表明其有良好的抗氧化活性,对DPPH的清除率为55.7%,羟基自由基的清除率为58.4%,超氧阴离子的清除率为75.4%。