目的：　　胰腺癌是消化系统较为常见的恶性肿瘤之一，占全身恶性肿瘤的1％～5％，在我国已成为人口死亡的十大恶性肿瘤之一，死亡率几乎与发病率一致，目前缺少有效治疗手段。只有10％～15％的胰腺癌患者诊断后有手术切除的机会，术后5年生存率仅5％，吉西他滨单药是目前进展期胰腺癌的标准化疗方案，有效率6％～11％，中位生存期仅仅半年左右。　　研究发现胰腺癌患者外周血中血管内皮抑素(endostatin)等与血管生成密切相关的蛋白含量显著升高，而在手术后或者化疗后恢复正常，对荷瘤小鼠应用血管内皮抑素联合吉西他滨进行处理，可以有效降低血清VEGF水平和微血管密度并抑制胰腺肿瘤生长，提示合理应用抗血管生成药物联合化疗治疗胰腺癌具有良好的临床应用前景。但并非所有患者都能从治疗中获益，深入研究抗血管药物作用机理，确定其生物作用靶点，也就成为筛选适宜人群以及疗效预测指标的关键，并为新药研发提供重要理论参考。　　miRNAs是一种小的非编码RNA分子，通过和靶基因mRNA形成沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译，从而在转录后水平调控基因表达。近年来研究表明miRNAs与肿瘤血管生成关系密切，通过对特定靶基因的调控，可以促进或抑制肿瘤血管生成。由于miRNA表达的高度保守性和时空特异性，只需要200多个miRNAs便可以将全身各个部位的肿瘤进行精确分类，而这是上千个基因和蛋白无法做到的。因此我们认为miRNA在抗肿瘤作用靶点方面，和基因与蛋白相比，有其独特的优势。将miRNA作为抗血管药物的靶点进行研究，可以筛选抗血管药物的特异miRNA，有助于快速有效地界定抗血管治疗的适宜人群以及作为肿瘤治疗新的分子作用靶点。　　血管内皮抑素是一种血管生成抑制剂，主要作用于血管内皮细胞，抑制病理性新生血管形成，是否对肿瘤细胞有直接的抑制和杀伤作用不是很清楚。越来越多的证据表明，以肿瘤细胞为中心的肿瘤微环境对肿瘤血管发生起着重要的调控作用。恩度是我国科研人员在血管内皮抑素的基础上研制的拥有自主知识产权的血管生成抑制剂，与血管内皮抑素相比具有更好的稳定性和更长的半衰期，临床上已经和化疗药物联合治疗肺癌等实体肿瘤并具有良好的疗效和安全性。本研究立足于此，以胰腺癌为研究对象，拟研究恩度对胰腺癌细胞系ASPC-1的miRNA表达谱系的影响，探讨miRNA在胰腺癌抗血管治疗中的地位和作用以及临床应用价值。　　为此我们应用高通量测序技术，检测了恩度对胰腺癌细胞系ASPC-1的miRNA表达谱系的影响，并对其中受到影响最大的miRNA进行了功能研究，初步探讨了miRNA作为抗血管药物作用靶点的可行性，为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。　　方法：　　1、胰腺癌细胞系ASPC-1传代培养　　2、恩度处理、CCK-8检测　　3、solexa测序平台研究恩度对胰腺癌细胞系ASPC-1 miRNA表达谱系的影响　　4、miRNA筛选和荧光定量RT-PCR验证　　5、恩度对miR-19a以及hBP1、RhoB、PTEN表达的影响　　6、miR19-a对hBP1、RhoB、PTEN表达的影响　　7、miR-19a对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞增殖的影响　　结果：　　1、恩度对ASPC-1细胞系有细胞杀伤作用，半数抑制浓度（IC50值）是1100μg/ml。　　2、恩度作用ASPC-1细胞后，通过对1465个miRNA进行测序，发现表达差异在2倍以上的miRNA有28个，其中11个miRNA表达下调，17个表达上调。选择下调倍数最多的miR-19a/19b进行深入研究。　　3、荧光定量RT-PCR结果表明恩度对miR-19a/19b的抑制作用。　　4、利用TARGETSCAN和PICTAR等软件预测结果显示HBP1和RHOB等可能是miR-19a的靶基因（其他研究结果已证实PTEN是miR-19a的靶基因）。　　5、将miRA-19a mimics和inhibitor转染ASPC-1细胞，RT-PCR结果证明转染成功。miR-19a mimics抑制了PTEN、HBP1、RHOB的mRNA和蛋白水平的表达，其inhibitor增加了上述基因表达水平。恩度同样可以增加PTEN、HBP1、RHOB的mRNA和蛋白表达。　　结论：　　1、恩度对胰腺癌细胞系ASPC-1有杀伤作用。　　2、在ASPC-1中获得了恩度相关的miRNA，其中miR-19a/19b家族下调最显著，可能是恩度在胰腺癌中的主要作用靶点之一。TARGETSCAN和PICTAR等软件预测发现HBP1和RHOB是miR-19a潜在的靶基因。　　3、恩度作用ASPC-1后，miR-19a表达下调，靶基因HBP1、RHOB和PTEN表达上调，与干涉miR-19a的结果一致，提示恩度杀伤肿瘤细胞的作用可能通过miR-19a相关候选靶基因如PTEN、HBP1、RHOB等所参与的信号通路实现的。　　4、靶向下调miR-19a表达可以抑制胰腺癌细胞增殖，提示miR-19a是胰腺癌药物治疗潜在的分子靶点。