北非蝎昆虫毒素AaHIT1在酵母菌中的表达

来源 :上海师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:renbaoshouxian
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物病虫害是农作物减产的主要原因之一,每年都给人类造成巨大的经济损失。为了防治植物病虫害人们研究开发出了许多化学农药,然而化学农药的大量使用给环境带来了极大的危害,因此人们开始利用微生物对植物进行生物防治方面的研究。 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)是良好的基因工程受体菌。使用安全、具有良好的耐热特性、易于保存、可通过酵母发酵大批量生产,产品成本低。北非蝎昆虫毒素AaHIT1(Androctonus australis Hector insect toxin)是一种从北非蝎的毒液中提取的一种昆虫神经毒素,它能专一地作用于昆虫的神经系统,而对人畜无害,在开发新型生物杀虫剂的领域里有着诱人的前景。 许多实验和文献证明,酵母菌是良好的基因工程菌受体菌,因此本实验将蝎昆虫毒素AaHIT1基因转入本实验室保存的酵母菌INVSC1中,构建基因工程菌AINVSC1。首先将AaHIT1与酵母表达载体质粒pYES2连接,构建得到pYES2/AaHIT1重组质粒,转化酵母菌INVSC1得到基因工程菌AINVSC1。通过SDS-聚丙烯酰胺电泳检测后,证明北非蝎昆虫毒素AaHIT1已在酵母菌INVSC1中表达。并采用喷叶喂养法喷洒玉米叶喂养黏虫(Mythimna seperata Walker),检测酵母工程菌AINVSC1表达的蝎昆虫毒素AaHIT1具有杀虫活性。 其次,实验结果表明AINVSC1菌液以及菌体高速离心破碎后的菌液上清对黏虫都具有触杀活性,并且菌液上清的触杀活性明显高于菌液的触杀活性。另外,通过用不同的培养温度、培养时间、接种量培养AINVSC1比较AaHIT1的黏虫触杀活性,我们发现28℃、5%接种量培养20h最有利于AaHIT1的表达且对黏虫的触杀活性较高。 通过生理生化实验表明,工程菌AINVSC1的理化活性相较于其野生宿主菌INVSC1基本一致。这说明该蝎昆虫毒素基因对其宿主菌生理生化特征的改变十分微小,进一步证明,酵母菌作为宿主菌,在转入外来基因后,其生理生化特征表现出良好的稳定性,证实酵母菌是一种良好的转基因受体。 通过致病菌拮抗实验,发现酵母工程菌AINVSC1对油菜菌核病菌有抑制能力 较INVSC1有微弱的促进。并且研究了酵母工程菌AINVSC1在各种培养条件下对油菜菌核病菌的抑菌效果,确定了酵母的工程菌最佳培养条件:培养温度为28℃,培养时间为20h,接种量为5%。 综上所述,本杀虫酵母工程菌AINVSC1为益生菌,具有环境友好的特征。将有利于农业病虫害的防治、生态环境的保护、园林景观植物的防护等。此项研究具有重要的科学技术价值,为进一步研制对环境友好的生物杀虫剂奠定基础。
其他文献
浮体闸是在传统的浮箱式闸门的基础上发展起来的,规范规定浮箱式闸门只能在静水或者流速很小的水域中使用,浮体闸突破了在静水中使用的限制,可以在动水中启闭,应用于平原地区城市
近年来,我国许多无外源污染的水库、湖泊由于季节、水量等因素突然发生水质咸化污染,成为威胁我国供水安全的一个重要因素,而这种污染的成因主要是源于底泥污染物的释放。本文以
地下水资源过量开采是一种潜在的灾害性危机,但却往往被人们所忽视,从而造成巨大的经济损失和环境地质灾害。地处新疆干旱地区的奇台县,由于地表水缺乏,导致地下水严重超采,
  通过对消火栓竖向分区原则的阐述及3个实际工程案例的分析,提出了三种分区形式,并给出了设计指导意见。
在我国北方,河口修建防潮闸后,由于下泄径流减少而产生闸下河道淤积属于普遍现象,由此影响到河口防洪、排涝和航运等功能的发挥。本文从工程实际出发,以解决防洪问题为目的,运用水
  本文分析了涉氨制冷企业的特点和火灾危险性,以青岛市为例阐述了该类企业的消防安全状况和存在的问题,从规范层面就涉氨综合类制冷企业在加工间火灾危险性的确定、重点区域
复杂地质岩体的三维可视化是地学可视化的重要分支之一。地质体对象包括内部属性和外部属性,在地下工程建设当中,岩体的产状分布和岩体结构表面形态特征特别是岩层的软弱结构
土石坝粗粒土的浸水湿化变形,是目前高土石坝设计理论中的关键问题之一,但未能很好解决。进行粗粒土室内试验研究时,由缩尺效应所引起的与工程实际差异很难把握。本文通过试
有限元法是伴随着电子计算机技术的进步而发展起来的一种新兴数值分析方法。它的基本思路是将结构物看成由有限个划分的单元组成的整体,以单元节点的位移或节点力作为基本未知
  人员密集、物资集中的超高层建筑因其楼层多、高度大,发生火灾时,疏散与扑救极为困难,容易造成群死群伤和重大损失,因此其避难场所的设计至关重要。科学合理的避难场所是提高