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背景与目的：
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，C．t)是性传播疾病的常见病原体之一。衣原体生殖道感染发病率逐年增加，女性若发生C．t的反复、慢性感染，可导致输卵管粘连、狭窄甚者闭锁，继而引发异位妊娠(EP)和输卵管不育(TFI)等，其具体机制尚不清楚。多数研究者认为免疫反应在慢性损伤后遗症的发生中起很大作用，其中沙眼衣原体热休克蛋白60(cHsp60)在免疫致病中起关键作用。
cHsp60是衣原体EB外膜的主要成分，基本功能是参与细胞结构的维持、修复和免疫，与人的相应Hsp60有48％的同源性。到目前为止，已有多项报告说明cHsp60与人类衣原体性疾病的免疫致病机制相关，推测cHsp60可能是人类衣原体疾病免疫致病的重要因素，是刺激机体产生免疫反应的重要表面抗原。对cHsp60保守抗原决定簇的自身免疫应答可能是引起人体局部免疫反应，导致女性输卵管损伤的关键因素。
国外研究表明，持续、长期的cHsp60抗体反应与输卵管中C．t的存在有关，而且Ct感染持续存在时间越长，cHsp60抗体反应越强，疾病越严重。目前对cHsp60的研究主要集中在抗原成分的识别及免疫致病机制方面，尚未有合适的能反映cHsp60抗体反应的免疫病理过程的动物模型，致病机制尚不清楚。目前国内的相关研究仅限于cHsp60抗原的表达及血清学检测的水平，动物模型和组织免疫病理学研究仍处于待开发状态。
本研究的目的：构建cHsp60原核表达载体pET28a-cHsp60并诱导其表达，纯化出可溶形式的目的蛋白。为下一步动物实验研究慢性上生殖道炎症模式下主要与cHsp60抗原有关的血清学的改变、免疫病理学变化及证实cItsp60是否为疾病发生过程中的关键因素提供cHsp60抗原。
材料与方法：
1.构建重组表达载体依据cHsp60基因序列，设计一对特异性引物，PCR法扩增目的基因。双酶切扩增片段和表达载体，酶切产物连接，连接产物转化入克隆菌株，筛选阳性克隆，抽提质粒，PCR、双酶切和测序鉴定。
2.目的蛋白的表达与纯化将单个转化菌扩大培养，以最佳条件诱导表达，收集菌体，超声波裂解，收集上清液，镍凝胶亲和层析得到纯化的目的蛋白。SDS-PAGE和Western-blot法检测纯化效果。标定最终体积、浓度，保存目的蛋白备用。
结果：
1.重组表达载体的鉴定应用PCR的方法，成功扩增出大量的目的基因片段，电泳检测结果与理论预测值相符。重组质粒PCR和双酶切鉴定结果也与理论值一致，表明目的基因已成功插入表达载体中。重组体DNA测序显示与Genebank一致。
2.目标蛋白的鉴定纯化蛋白产物的SDS-PAGE和Western-blot检测可观察到清晰的特异条带，表明目的蛋白已有效分离，并具有抗原性。
结论：
1.pEI系统是一个功能强大的表达系统，应用pET-28a质粒克隆cHsp60基因、表达融合蛋白是可行的，可以诱导产生可溶的活性蛋白。
2.利用His-tag融合标签可以高效、快速地纯化目的蛋白。
3.木实验证明：利用原核表达系统，构建cHsp60基因重组体，表达目的蛋白的设想是可行的，可以获得可溶形式的蛋白。