论文部分内容阅读
动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是心脑血管病的主要病理基础，目前关于AS的病因较一致的看法是，由损伤、炎症、免疫功能障碍三者相结合作用的结果。关于AS的中医病机，结合AS炎症学说所提及的各种病因及介质，我们认为与中医毒邪致病论的病因病机一致:毒邪致病，因毒而成痰成瘀，毒、痰、瘀三者相互促生，形成恶性循环，以毒为引发关键，以痰、瘀为有形之病灶。我们以丹参多酚酸B为研究对象，从基础研究方面，探讨其“活血解毒-抑制炎症反应-抗动脉粥样硬化”的可能机制。
目的:研究丹参多酚酸B对动脉粥样硬化大鼠脂质代谢影响，对血管壁的保护及抗动脉粥样硬化斑块的作用；观察其对动脉粥样硬化炎症反应相关细胞因子和对OX40/OX40L信号通路相关蛋白的调控作用，从多环节、多层次探讨丹参多酚酸B抗动脉粥样硬化的可能分子机制，为进一步临床应用提供科学依据。
方法:八周龄雄性Sprague-Dawley大鼠，60只，随机分成6组。正常组给予正常饲料喂养，其余5组(模型组、丹参多酚酸B低剂量组、中剂量组、高剂量组，辛伐他汀组)喂养高脂饲料一月。于用药前，高脂饲料喂养的大鼠连续3天腹腔注射给予VitD3，然后给予相应药物灌胃。4周后，每组随机处死2只大鼠观察动脉粥样硬化病变水平。继续喂养2周后，处死所有大鼠。1)取主动脉根部的4个切面，行HE染色观察斑块内部成分；取心肌组织，行电镜观察；2)利用大型生化仪检测大鼠血清脂质改变；3)同时取心肌组织用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性相关指标，包括肿瘤坏死因子a(TNF-a)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)；4)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测主动脉OX40/OX40L基因表达；5)蛋白免疫印迹法(Western Blot法)测定腹主动脉OX40/OX40L蛋白表达。
结果:(1)通过光镜下观察HE病理染色血管动脉粥样硬化病理形态结果提示，各用药组均能改善血管内壁脂质侵蚀，粥样硬化的情况；通过透射电镜观察心肌超微结果发现，各用药组均能改善心肌纤维化程度。
(2)与正常组比较，高脂饲料喂养的模型组及各用药组的血脂水平，除甘油三酯外，其余指标均明显高于正常组(P<0.05)。与模型组比较，丹参多酚酸B低剂量和高剂量组的血清TG明显下降(P<0.05)，丹参多酚酸B各剂量组和辛伐他汀组的血清LPA明显下降(P<0.05)。
(3)观察心肌TNF-a、IL-1、IL-6水平发现:与正常组比较，模型组、丹参多酚酸B低剂量组和B高剂量组以及辛伐他汀组心肌TNFα水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较，中药不同浓度组以及辛伐他汀组心肌TNFα浓度显著下降(P<0.05)；与正常组比较，模型组的IL-1a明显升高(P<0.05)；与正常组比较，模型组和丹参多酚酸B低剂量组心肌IL-6浓度明显升高(P<0.05)。与模型组比较，丹参多酚酸B中剂量组、高剂量组以及辛伐他汀组IL-6浓度明显降低(P<0.05)。
(4)观察血管OX40/OX40L基因表达:模型组及各用药组OX40mRNA均较正常组表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较，丹参多酚酸B低剂量组、中剂量组以及辛伐他汀组OX40mRNA表达明显下调(P<0.05)；与正常组比较，模型组及各用药组OX40LmRNA的表达水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较，丹参多酚酸中剂量组以及辛伐他汀组OX40L mRNA表达明显下调(P<0.05)
(5)观察血管OX40/OX40L蛋白表达:模型组以及丹参多酚酸B各剂量组的OX40的蛋白表达水平明显上调(P<0.05)；与模型组比较，丹参多酚酸B中剂量组以及高剂量组的OX40蛋白水表达水平明显上调(P<0.05)；与正常组比较，丹参多酚酸B中药低剂量组和高剂量组的OX40L的蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。
结论：(1)丹参多酚酸B能降低动脉粥样硬化大鼠血清Lpa，并从形态学角度证明了其具有抗动脉粥样硬化、改善心肌缺血损伤的作用。
(2)动脉粥样硬化大鼠的炎性因子，诸如TNFα、IL-1α、IL-6分泌明显异常。丹参多酚酸B具有降低TNFα、IL-6分泌的作用，从而抑制动脉粥样硬化的炎症反应。
(3)丹参多酚酸B具有明显抑制大鼠动脉粥样硬化血管OX40/OX40L基因表达的作用，通过阻断OX40/OX40L免疫信号通路，抑制树状细胞的分化成熟，抑制T细胞的功能，从而达到抑制动脉粥样硬化炎症反应的作用。