【摘 要】
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脊髓损伤(spinal cord injury SCI)是临床常见疾病,脊髓损伤患者的数量与日俱增。外伤性的脊髓损伤危害严重,常导致截瘫。包括外科手术、药物治疗等在内,很多方法正在用于治
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脊髓损伤(spinal cord injury SCI)是临床常见疾病,脊髓损伤患者的数量与日俱增。外伤性的脊髓损伤危害严重,常导致截瘫。包括外科手术、药物治疗等在内,很多方法正在用于治疗脊髓损伤,恢复患肢功能。神经干细胞(NSCs)移植是一种新的治疗方法,植入的细胞可以替代受损区域的细胞,促进神经元回路的重建,恢复脊髓功能。本研究是通过分子生物学技术,在体外构建整合有人BDNF基因的逆转录病毒载体,感染体外培养的脊髓神经干细胞,诱导细胞向神经元分化。为以后干细胞体内移植治疗脊髓损伤提供实验依据。 实验第一部分利用无血清培养和单细胞克隆技术在E14小鼠的胎鼠脊髓中分离出具有单细胞克隆能力的细胞,并进行培养、传代观察。采用间接免疫荧光检测克隆细胞的神经巢蛋白(nestin)抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达,并比较不同条件下对神经干细胞分化的影响。结果证实: 1.从孕14天小鼠胚胎脊髓中成功分离出的NSCs具有连续克隆能力,可传代培养,表达nestin抗原。分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。 2.不同条件诱导NSCs分化结果不同。RA可以显著提高神经元的分化比例,但同时RA诱发细胞凋亡,导致诱导后存活细胞数量下降;BDNF同样可以提高神经元的分化比例,并有保护细胞存活的作用。因此,BDNF作为一种神经营养因子,更适合做为目的基因转染NSCs。
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