红树林内生真菌A-1-5-5次生代谢产物的研究以及BFA启动KB细胞凋亡的蛋白质组学初步研究

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海洋真菌是近年来寻找新药的研究热点,红树林内生真菌是其重要的组成部分。由于红树林内生真菌能够产生结构新颖的化合物,已经越来越受到人们的重视。 本文就对一株来源于福建漳州龙海的红树植物秋茄的内生真菌菌株A-1-5-5的次生代谢产物及其生物活性进行了初步研究。此外,还利用蛋白质组学技术初步探讨了化合物布雷菲德菌素A(BFA)对人口腔上皮癌KB细胞的作用机理。 采用形态学及分子生物学的鉴定方法对菌株A-1-5-5进行鉴定,根据其形态及ITS1-5.8sDNA-ITS2基因片断的测序结果,将该菌株归类为拟茎点霉属(Phomopsis sp.)。对该菌株的发酵产物进行分离纯化,得到了8个化合物(Y1~Y6,W1、W2和Q1,其中Q1是Y1的的不完全乙酰化产物)。经鉴定,化合物Y1、Q1和W2是新化合物,分别命名为pbomopsis A、pbomopsis a和pbomopsis B;Y2~Y6和W1均为已知化合物,分别为过氧化麦角甾醇、松胞菌素 H、松胞菌素 J、12-羟基硬脂酸和3-羟基丙酸。 我们对其中的2个化合物:phomopsis B(W2)和松胞菌素H(Y3/Y5)的的抗肿瘤、抗菌以及抗氧化活性进行了测定.结果显示,化合物Y3/Y5对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有微弱的抑制活性,MIC均大于100μg/mL;对肿瘤细胞Raji和HePG Ⅱ有一定的细胞毒活性,其IC50分别为250μg/mL和300μg/mL。化合物W2仅对橙色青霉有微弱的抑制活性,MIC大于100μg/mL;对肿瘤细胞Raji和HePGⅡ有比较明显的细胞毒活性,IC50分别为300μg/mL和550ng/mL。两个化合物都没有明显的抗氧化活性。 此外,我们还应用蛋白质组学技术初步探讨了化合物布雷菲德菌素A(BFA)对人口腔上皮癌KB细胞作用的机理。分别提取BFA作用前后的KB细胞总蛋白质,构建其相应的双向电泳图谱,选取差异蛋白点,以MALDI-TOF-MS获取肽指纹图谱并在MSDB数据库进行检索测定。最后得到5个蛋白点,分别是与半胱氨酸亚磺酸脱羧酶相关的蛋白2、调节钾离子通道的G蛋白、高尔基体外侧网络糖蛋白51、SNM1类的蛋白以及Stoninl mRNA编码的蛋白。已知BFA的主要功能是阻断蛋白质从内质网(ER)到高尔基体的转移,从而导致高尔基体的分解。综合本实验的结果我们推断出BFA对KB细胞的抑制机理可能为:1.通过对内质网的干扰,阻止蛋白从内质网回到高尔基体内被继续加工,进而影响细胞的正常代谢;2.同时,该化合物还通过阻止形成Arfs-GTP的活化状态,从而干扰胞质外源胞被蛋白的形成进而影响离子通道的开关,最终抑制细胞的增殖、分化。 本文研究结果表明,红树林内生真菌中蕴藏着结构新颖的化合物,是开发新药的重要资源。
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