目的:宫颈癌是全球发病率居第二位的妇女恶性肿瘤,在我国的发病率居首位[1],其高发区连接成片,且发病人群有年轻化的趋势[2],成为严重威胁妇女健康的疾病之一。宫颈癌的发生、发展是一个由量变到质变,由渐变到突变的过程。局部浸润和淋巴结转移不仅影响手术效果,而且直接关系患者预后。淋巴结转移是宫颈癌的主要转移途径,在早期即可发生。有文献报道,无淋巴结转移者五年生存率为82.2%.有淋巴结转移者五年生存率为50.8%[3]。IL-8是1987年Yoshimur等[4]发现的第一个趋化因子,当时被命名为单核细胞衍生的中性粒细胞趋化因子,是与炎症相关的CXC趋化因子。随着对IL-8及其受体生物学活性和作用机制研究的深入, Strieter等[5]发现IL-8的NH2末端有一谷氨酸一亮氨酸一精氨酸( Glu-Leu-Arg )组成的三联体氨基酸基序一ELR基序,该基序在IL-8促血管生成中起重要作用。Murphy等[6]也发现IL-8参与肿瘤血管形成,与肿瘤的侵润、转移密切相关。随后研究者在小细胞肺癌[7]和胃癌[8]及卵巢癌[9]等也得出了类似的结果,提示IL-8参与肿瘤的发生和发展。IL-8可以促进肿瘤细胞的增生,使肿瘤细胞向内皮细胞迁移[10];调节肿瘤细胞及周围基质细胞分泌MMP-2 , MMP-9并增强其活性,从而促进胶原酶活性,提高肿瘤细胞的体外侵袭力[10,11]。IL-8也可以促进血管内皮细胞的增生、迁移、抑制其自发性凋亡及增加血管的通透性[11],有利于肿瘤细胞转移。另外,还有研究显示淋巴管内皮细胞可通过分泌趋化因子吸引肿瘤细胞,进而主动促进肿瘤细胞的淋巴结转移[12]。但对IL-8在宫颈癌中的作用研究甚少,Tjiong等人[13]通过比较宫颈分泌物和阴道冲洗液中IL-8的水平认为宫颈癌和CIN病例阴道局部可能产生高水平的IL-8和IL-6,这些高水平的细胞因子有可能对局部炎症反应和肿瘤生长有一定作用。日本的Fujimot等人[14]的研究证实IL-8与宫颈癌的血管生成有关,在宫颈癌Ⅰ-Ⅳ期的发展过程中,血清IL-8的水平也随之增高,该研究虽然证实了IL-8与宫颈癌的血管生成及预后相关,但并未阐明其分子作用机制。吴素慧等[15]对早期宫颈鳞癌进行了cDNA基因芯片筛查,结果表明IL-8在有淋巴结转移宫颈癌组织中的表达较无淋巴结转移宫颈癌组织高3.4倍,推测其可能在早期宫颈癌的浸润、转移中起重要作用。尽管宫颈癌的治疗研究已近百年,成绩显着,但其疗效还未能达到普遍接近“早期宫颈癌5年生存率90%-100%”这样的水平。因此,在宫颈癌的治疗过程中,需要充分考虑影响预后的变异因素,按“个体化”治疗的原则设计针对性治疗方案,改进治疗,提高疗效。近些年来,随着细胞工程和基因工程技术的发展,肿瘤免疫治疗亦得以迅猛发展,细胞因子基因治疗成为目前研究的热点。本实验拟通过观察IL-8对宫颈癌侵袭和转移能力的影响作用,探索以IL-8为靶点的对宫颈癌的靶向治疗作用,以期为宫颈癌的诊治和预后判断提供新的指标,也为宫颈癌的个性化治疗寻求一条新的途径。方法:1质粒pcDNA3.1(+)-hIL-8和pcDNA3.1(+)的提取及鉴定采用分子生物学方法大量制备质粒pcDNA3.1(+) -hIL-8和pcDNA3.1(+),酶切鉴定,分光光度仪检测DNA浓度。2重组质粒转染宫颈癌Hela细胞及抗性克隆细胞的筛选以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)/hIL-8重组质粒转染不表达该目的基因的Hela细胞,G418筛选获得阳性细胞株。3 RT-PCR方法鉴定,证实转染外源性IL-8基因的Hela细胞表达IL-8情况。4检测细胞增殖情况MTT法检测转染pcDNA3.1(+)/IL-8组、pcDNA3.1(+)组与未转染组Hela细胞的生长增殖能力,绘制生长增殖曲线。5 Transwell小室法检测宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力选用Transwell小室和Matrigel胶建立了体外侵袭模型,评价稳定转染pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒的宫颈癌细胞侵袭能力的变化情况。Transwell小室分为上下两室,中间以聚碳酸脂滤膜(微孔直径为8μm)相隔,微孔允许肿瘤细胞穿越,Matrigel是大鼠ESH肉瘤细胞外基质提取物,由Ⅳ型胶原、层粘蛋白、硫酸肝磷脂蛋白多糖及整合素等组成,其成分与组织基底膜相似,可模拟组织基底膜,用以观察细胞同细胞外基质间的相互作用。将Matrigel胶铺在Transwell小室的聚碳酸脂膜上层,计数并比较穿膜细胞数。结果:1 RT-PCR法检测到稳定转染目的基因后的Hela/hIL-8细胞稳定表达IL-8蛋白。2 MTT法结果显示,转染pcDNA3.1(+)/ IL-8后第1~6天Hela细胞光吸收值分别为: 0.56±0.08、0.63±0.06、0.93±0.09、1.20±0.06、1.32±0.12、1.39±0.14;未转染组第1~6天为: 0.62±0.07、0.70±0.10、0.84±0.12、0.92±0.10、0.96±0.14、1.01±0.10,转染1天开始,三组细胞的光吸收值两两比较在统计学上具有显著差异(P<0.05),且细胞的增殖率随着时间的延长呈现上升趋势。3 Transwell小室侵袭实验结果显示,未转染组、空质粒组和IL-8组穿膜细胞数分别为:101.47±13.52、98.07±13.97、163.73±12.98。转染IL-8cDNA组细胞较转染空质粒组和未转染组细胞穿膜细胞数明显增加,(P<0.05)差异有显著性意义,提示转染IL-8基因后增加了宫颈癌细胞的侵袭能力。结论:1 IL-8重组质粒通过脂质体介导可以有效的转染人宫颈癌Hela细胞,并在细胞中稳定表达。2 IL-8可以通过促进宫颈癌细胞的增生,转移及促进宫颈癌的血管生成方面促进宫颈癌的浸润和转移。但其确切的机制还有待遇进一步的深入研究。