论文部分内容阅读
精氨酸甲基化作为蛋白质翻译后修饰的一种，在信号转导、转录活化、蛋白质分拣等生命过程中起重要的作用。hnRNP K也可以发生精氨酸位点的甲基化，但是对于这种修饰的功能和调控机制了解得很少。 实验中发现紫外线可以引起hnRNP K甲基化修饰的变化。通过免疫共沉淀、GST Pull-Down实验，证明了甲基化修饰可以促进hnRNP K和p53的直接结合，并且证明这种结合力的增加是由于促进了hnRNP K和p53的DNA结合结构域（DBD）的结合。通过ChIP和RT-PCR实验，证明抑制hnRNP K的甲基化会降低UV诱导的p53与p21启动子区的结合及p53下游基因的转录。在转染了p53温度敏感突变体（p53V143A）的p53基因缺失的Saos-2细胞中，抑制hnRNP K的甲基化也会降低p53与p21启动子区的结合及p53下游基因的转录。这些结果表明hnRNP K的精氨酸甲基化修饰在细胞应激反应中的重要作用。 通过免疫共沉淀、GST Pull-Down实验，还证明MDM2和hnRNP K可以直接结合，结合位点是hnRNP K的KI结构域。进一步的实验表明，该结构域发生甲基化修饰后会促进hnRNP K和MDM2的结合。过表达PRMT1会促进hnRNP K的降解，但不会影响甲基化位点突变的hnRNP K的降解。这些结果为细胞内蛋白甲基化修饰提供了一个可能的调控机制。 通过差减免疫的方法，我们得到了一个特异性识别非小细胞肺癌的单克隆抗体-Glc82c240。通过Western blot和免疫沉淀，确定该单抗的抗原是Annexin A1，并且确定了抗体的识别表位是Annexin A1的N末端。通过RT-PCR的方法，证明Annexin A1在癌细胞中高表达。同时，抗体Glc82c240的存在不会抑制肺癌细胞株的增殖，但会抑制肺癌细胞株Glc82的侵润。这些结果为我们制备新的抗肿瘤药物提供了可能。