论文部分内容阅读
溶菌酶是一种能水解由N-乙酰葡萄糖胺(NAG)和N-乙酰胞壁酸(NAMA)形成的β-1，4糖苷键的酶，在免疫反应中有重要作用。本研究以日本鳗鲡(Anguilla japonica)为研究对象，根据日本鳗鲡基因组数据库，预测并扩增出2类，共5个溶菌酶基因，其中1个C-型溶菌酶，4个G-型溶菌酶，分别命名为AJLysC、AJLysG1、AJLysG2、AJLysG3、AJLysG4。它们的cDNA全长分别为811、749、1352、1175和733 bp，分别编码143、193、185、185和187aa。经SignalP预测，AJLysC和AJLysG1的N-端分别包括15和19aa的信号肽，另外3种溶菌酶不具有信号肽。基因组分析显示，AJLysC，AJLysG2，AJLysG3，AJLysG4的基因结构和其他鱼类相似，C-型溶菌酶具有4个外显子，G-型则具有5个。但是，AJLysG1的基因结构与其他鱼类G-型溶菌酶的不同，具有6个外显子，这是鱼类中首次发现有6个外显子的G-型溶菌酶基因。与其他鱼类的溶菌酶比对发现，AJLysG1缺失其他G-型溶菌酶通常认定的第2个酶活性位点氨基酸，Asp。AJLysC与其他很多物种的C-型溶菌酶具有较高的同一性，如与牙鲆的同一性为72.7％; G-型溶菌酶中AJLysG2，AJLysG3，AJLysG4彼此之间以及与其他物种G-型溶菌酶的同一性相对较高，而AJLysG1与其他物种以及如前所述3种G-型溶菌酶的同一性均不高，并且都在50％以下。 组织表达分析显示，所有5个溶菌酶基因在12种检测的组织中均有表达。其中C-型溶菌酶在胃及免疫相关的组织表达量较高;G-型溶菌酶在在各组织/器官中的表达则差异较大，例如，AJLysG1在皮肤和肌肉中的表达量最高，AJLysG2在免疫组织/器官如血液、头肾、体肾和鳃中表达量较高。经迟缓爱德华氏菌刺激48小时后，这5个溶菌酶基因在大部分组织/器官中的表达量均有上调，其中在血液，肠道和头肾等组织的上调较为显著。此外，本研究还构建了AJLysG2，AJLysG3，AJLysG4的真核表达载体，并且在EPC细胞中实现了表达。重组蛋白对溶壁微球菌有明显的生长抑制作用;它们对水产病原菌特别是鳗鲡病原菌的抑制作用是值得研究的内容。