【摘 要】
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肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)是一种作用于多种细胞的多功能细胞因子,在体外和动物实验中显示了强大的抑制及杀伤肿瘤作用.该实验首先从家兔外周血中得到总RN
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肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)是一种作用于多种细胞的多功能细胞因子,在体外和动物实验中显示了强大的抑制及杀伤肿瘤作用.该实验首先从家兔外周血中得到总RNA,经逆转录PCR反应获得大量家兔TNF-α cDNA,将目的基因插入原核表达载体pBV220的启动子下游,构建了原核重组表达质粒,将鉴定后的正向阳性重组表达质粒命名为pBV220/RTNF.将重组质粒pBV220/RTNF用CaCl<,2>法转化入宿主菌DH5α中,在42℃条件下进行热诱导,使其在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE检测,证明原核重组表达质粒在大肠杆菌DH5α中高效表达目的蛋白.此外,将上文中的目的基因插入pcDNA3真核表达载体,置于CMV启动子之下,构建成基因疫苗真核表达质粒pcDNA3/RTNF.将此真核重组表达质粒转化入DH5α菌中,将来拟用作基因疫苗用于基因免疫研究之中.
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