本论文主要分三部分:Ⅰ.单个生物分子的检测。Ⅱ.全内反射荧光显微镜检测人胃癌细胞膜上的转铁蛋白受体。Ⅲ.全内反射荧光显微镜检测人胃癌细胞单个内涵体的形成。 Ⅰ.在论文的第一部分首先对单分子检测的研究进行了简单的介绍。其次对激光诱导荧光检测单分子进行了详细的综述。这一部分涉及到单分子检测和操纵技术、单分子检测的应用、单分子检测的技术关键及单分子证据、荧光探针及展望。重点对全内反射荧光显微术及在生物单分子检测的应用进行了介绍,包括显微镜成像原理、离体和活细胞中的生物单分子检测。共引用文献99篇。 Ⅱ.本论文的第二部分对全内反射荧光显微镜检测人胃癌细胞膜上的转铁蛋白受体进行了详细的研究。我们对背景噪声的降低,细胞贴壁时间,细胞密度,转铁蛋白的孵育温度,浓度,时间,加入顺序等多种因素进行了研究。确定人胃癌细胞膜上的转铁蛋白受体的检测条件为:细胞密度:5×10⁵个/mL;细胞贴壁时间:10h;转铁蛋白的孵育温度:4℃;浓度:1.25×10^-8mol/L;时间:30min;加入顺序:细胞与转铁蛋白孵育离心后再贴壁。实验中用全内反射荧光显微镜测定了胃癌细胞膜上转铁蛋白受体及其扩散。大量的未荧光标记的转铁蛋白与FITC标记的转铁蛋白同时加到细胞上表明受体结合蛋白的特异性。 Ⅲ.本论文的第三部分是全内反射荧光显微镜检测人胃癌细胞单个内涵体的形成。这是首次用全内反射荧光显微术测定了细胞中的内吞转铁蛋白形成内涵体的过程。实验中以Alexa488标记的转铁蛋白4℃下与细胞膜上的受体结合,离心去除未结合的转铁蛋白,细胞贴壁10h后用PBS冲洗2次,将未贴好的细胞冲掉,然后在37℃下转铁蛋白发生内吞形成内涵体。