白藜芦醇调节人髓母细胞瘤细胞Survivin和Bcl-2表达及其生物学意义分析

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kitty1973
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目的:1)探讨Survivin,Bcl-2和Bax在人髓母细胞瘤细胞系UW228-2,-3细胞内的表达情况;2)观察白藜芦醇对具有不同化疗药物耐受特点的人髓母细胞瘤细胞系UW228-2,-3细胞内的Survivin,Bcl-2和Bax基因表达的影响3)研究在体情况下(in vivo),人髓母细胞瘤内Survivin,Bcl-2的表达特点。通过上述研究,进一步了解1)白藜芦醇诱导髓母细胞瘤凋亡的分子机制; 2) Survivin,Bcl-2和Bax与髓母细胞瘤生长、分化、凋亡以及耐药之间的关系,以期加深对白藜芦醇抗髓母细胞瘤作用的认识,为其实际应用提供更多的依据。方法:人髓母细胞瘤细胞系UW228-2,-3分别培养于含10%进口胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中,用白藜芦醇,resveratrol,简称Res(100μM)处理细胞,观察白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞的生长、分化和凋亡的影响;细胞形态学观察和免疫细胞化学染色用预先置于培养皿的细胞玻片进行;免疫细胞化学、Western-blot和RT-PCR方法系统地分析白藜芦醇处理前后凋亡相关基因Survivin, Bcl-2和Bax表达水平的改变及其与细胞生长、分化、凋亡及耐药的关系。采用凋亡核的TUNEL标记染色对白藜芦醇诱导的髓母细胞瘤细胞系UW228-2,-3的凋亡做检测,对临床收集的11个髓母细胞瘤及瘤旁脑组织的石蜡组织微阵列组织点,进行Survivin和Bcl-2抗原的免疫组织化学染色。结果:1)白藜芦醇100μM作用48小时后可抑制髓母细胞瘤细胞生长,同时促进细胞的分化和凋亡:白藜芦醇促使UW228-2,-3靶细胞发生分化的形态学改变,细胞细长而有突起;TUNEL检测结果显示白藜芦醇促使UW228-2,-3靶细胞发生细胞凋亡,凋亡比分别为3.54%、4.98%;2)UW228-2,-3两个细胞系均有Survivin, Bcl-2和Bax表达;3)白藜芦醇处理前后Survivin, Bcl-2和Bax基因的表达在两细胞系略有不同:化学药物不敏感细胞系UW228-2在白藜芦醇100μM作用48小时后下调Survivin的表达,上调Bcl-2和Bax的表达;而化学药物敏感细胞系
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