月季（Rosa chinensis）是我国传统十大名花之一,原产于中国,距今已有二千多年的栽培史。月季喜温暖湿润、光照充足的环境,高温会使月季进入半休眠状态。我国南方地区,夏季气候炎热,影响很多月季品种的生长发育,高温往往还伴随着高湿情况,使月季病虫害加重,严重降低了月季的开花品质,导致其观赏性不能达到最佳水平。目前关于月季耐热品种的选育主要依靠田间观察和传统的杂交育种,耗费周期较长,因此,了解月季响应高温胁迫的分子机制,利用基因工程技术手段定向、高效地改善月季的耐热性具有重要意义。小分子热激蛋白（small Heat Shock Protein,sHSP）是植物响应热胁迫中重要的功能蛋白,为了揭示月季sHSP基因抗热的分子机制,本研究前期对‘月月红’进行48°C热处理0、1、2、6、12h,通过转录组测序,获得13个差异表达的unigenes,结合qRT-PCR,挑选表达水平显著上调的5个候选基因,进行基因的克隆;再通过ExPASy protparam、DNAMAN、MEGA对所得基因的氨基酸序列进行生物信息学分析、保守结构域分析和聚类分析;结合sHSP研究现状,挑选目的基因,构建亚细胞定位载体,瞬时转化烟草（Nicotiana tabacum）,确定其在细胞中的定位;构建超量表达载体,异源转化拟南芥（Arabidopsis thaliana）,获得转基因阳性苗并进行耐热性初探。主要研究结果如下:1、结合转录组数据和qRT-PCR结果,筛选得到5个表达水平有极显著上调的sHSP基因,RcHSP18.1、RcHSP17.9、RcHSP17.8A、RcHSP26.5和RcHSP24.8,并克隆得到了全长序列。氨基酸序列比对分析发现:RcHSP18.1、RcHSP17.9、RcHSP17.8A、RcHSP26.5和RcHSP24.8编码的氨基酸序列均含有植物sHSP特有的ACD保守结构域（α-crystallin domain）,包括一组β2-β9基序,和一个保守的I/V-X-I/V基序;聚类分析表明RcHSP17.8A、RcHSP18.1属于CI类,RcHSP17.9属于CII类,RcHSP26.5属于M类,RcHSP24.8属于P类。2、构建了35S::RcHSP18.1-YFP、35S::RcHSP17.9-YFP、35S::RcHSP17.8A-YFP、35S::RcHSP24.8-YFP亚细胞定位载体,瞬时转化烟草,结果表明:三个胞质类‘月月红’小分子热激蛋白均定位于细胞质中,说明它们在胞质中发挥作用,叶绿体类小分子热激蛋白RcHSP24.8则定位于叶绿体中,可能在热胁迫下保护光合系统。3、获得了35S::RcHSP18.1、35S::RcHSP17.9、35S::RcHSP17.8A、35S::RcHSP24.8超量表达载体,通过浸花法侵染哥伦比亚型拟南芥,经过抗性筛选和半定量RT-PCR检测,分别获得8、12、18、7棵T₁代阳性苗,对T₂代种子进行分离比统计,获得4个单拷贝株系,35S::RcHSP18.1 OE-9、35S::RcHSP17.8A OE-5、35S::RcHSP17.8A OE-7、35S::RcHSP24.8 OE-9,对所收的单拷贝株系的T₃代种子进行筛选,得到6个纯合株系,分别为:35S::RcHSP18.1 OE-9-11、35S::RcHSP17.8A OE-5-6、35S::RcHSP17.8A OE-7-10、35S::RcHSP24.8 OE-9-5、35S::RcHSP24.8 OE-9-9、35S::RcHSP24.8 OE-9-10。4、对所得的纯合株系幼苗进行耐热性初探,结果证明,5d苗龄的幼苗在皿中经45℃,3h处理后,22℃恢复5d,RcHSP24.8 OE-9-5超表株系的存活率为47%,野生型的存活率为35%,RcHSP24.8 OE-9-5超表株系表现出较强的耐热性。