酱油是一种营养丰富、色泽和风味独特的调味品。米曲霉沪酿3.042是酱油酿造中应用最广泛的菌种，其产蛋白酶活力，特别是产中性蛋白酶活力，影响到原料中蛋白质向氨基酸的转化，是酱油生产的核心因素。目前，我国酱油酿造的原料利用率总体水平不高，这不仅极大地浪费了资源，而且也限制了酱油品质的提高。因此，通过改良菌种，提高成品曲酶活是酱油实际生产中一个永恒的课题，这类研究对生产具有很重要的意义。 本研究通过对沪酿米曲霉3.042孢子进行原生质体的制备，用紫外线-LiCl,NTG复合诱变，获得8株中性蛋白酶活力达到6000 U/g(干基)以上的突变株群，构建成后续基因组改组育种的突变文库。基于基因组改组(Genome shuffiing)多亲株、多轮改组的特点，结合原生质体双灭活的筛选方法，将8株突变高产株分组通过紫外灭活(15 w，10 cm，15 min)和热灭活(85℃，5 min)，第一轮多亲株PEG介导融合，进行基因组改组育种，然后将融合高产株同样进行第二轮多亲株。PEG介导融合，两次融合后共获得4株性蛋白酶酶活提高到7000 U/g(干基)以上的融合株，其中最高产株较原始出发菌株产中性蛋白酶活力提高76％，初步证明了基因组改组技术在米曲霉育种上的可行性。 同时建立了用于中性蛋白酶高活力诱变株快速筛选的钙黄绿素蓝-铜配合体系。在pH7.2磷酸盐缓冲体系，1×10<-6>mol·L<-1>钙黄绿素蓝-Cu<2+>，0.1g·L<-1>蛋白底物条件下可以用于蛋白酶活力测定及实时在线检测。