论文部分内容阅读
溶纤酶是指能够溶解纤维蛋白的一类物质的总称，微生物是溶纤酶最重要的来源之一。微生物溶纤酶具有溶纤活力高、不易引起出血、半衰期长和可经消化道直接吸收等优点，被认为是最具开发潜力、安全、廉价的溶栓药物之一。本课题从筛选产溶纤酶菌株工作开始，主要完成了以下研究内容：
从富含蛋白质的环境中，采集菌种分离材料13份，经预处理、富集培养、平板初筛和摇瓶发酵初筛、复筛，最终从一份屠宰场土样中分离获得一株产溶纤酶菌株W05，产酶活力达230IU/mL，相当于尿激酶活力870IU/mL；对菌株的初步鉴定结果表明，该菌株的性状特征与巨大芽孢杆菌相似。
采用紫外线单独处理和紫外线-氯化锂复合处理对产酶菌株Wo5进行诱变，经初筛复筛获得一只溶纤酶高产突变株WUL99，产酶活力达370IU/mL，相当于尿激酶活力1083IU/mL，比出发菌株活力提高了24％；
采用单因素实验和响应面实验法对突变株WUL99发酵产酶培养基和培养条件进行了优化，确定的最优培养基组成为(g/L)：糖蜜60，豆粉11，酵母膏6.9，硫酸镁0.9，氯化钙0.2，磷酸氢二钾1；确定的最优发酵条件为：初始pH7.2，发酵温度37℃，摇床转速180r/min，种子液种龄17h，接种量10％，装液量30mL/250mL。在最优培养基和最优发酵条件下，突变株WIL99产酶活力达到470IU/mL，相当于尿激酶活力1408IU/mL，比优化前提高了30％；
研究了突变株WUL99所产溶纤酶的部分酶学性质。酶的热稳定性实验结果表明，该酶在无底物情况下常温下稳定，50℃以上时失活迅速；酶的最适作用温度60℃，最适作用PH为7.5；Mn2+对其有促进作用，Cu2+、Ni+、Ag+对其有抑制作用，其它离子影响不大。