【摘 要】
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目的：研究用RNAi技术下调胰腺癌Panc-1细胞平衡型核苷载体1(human equilibrativenucleoside transporter 1，hENT)对氟尿嘧啶(5-Fluorouraci，5-FU)细胞毒性的影响。方法：设计并合成两个能表达特异性针对hENT的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列，分别与载体质粒pSilence 4-1-CMV neo连接重
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目的：研究用RNAi技术下调胰腺癌Panc-1细胞平衡型核苷载体1(human equilibrativenucleoside transporter 1，hENT<,1>)对氟尿嘧啶(5-Fluorouraci，5-FU)细胞毒性的影响。
方法：设计并合成两个能表达特异性针对hENT<,1>的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列，分别与载体质粒pSilence 4-1-CMV neo连接重组，构建针对hENT<,1>的shRNA表达质粒pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb。用脂质体法将pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb转染胰腺癌Panc-1细胞，并以含G418(600ug/ml)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1)。RT-PCR检测pSilence-hENT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞中hENT<,1>-mRNA的下调效果及稳定性，选择干扰效果较好的pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞进一步实验；用MTT法检测细胞在含序列浓度5-FU(0～2×10 ng·L<-1>)的培养液中48h后的生存率，并计算IC<,50>。
结果：测序显示重组质粒中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示pSilence-hENT<,1>SbPanc-1细胞hENT<,1>的mRNA表达水平下调，并在两个月内保持相对稳定。MTT结果显示pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞组氟尿嘧啶的IC<,50>显著下降，为Panc-1细胞组IC<,50>的51.52％(P<0.01)。
结论：用RNAi方法下调hENT<,1> mRNA表达可增强5-FU对胰腺癌细胞的毒性，hENT<,1>将可能成为提高化疗效果的新的药物作用靶点。
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目的：研究125I－RC-160(125I-伐普肽)对转染人生长抑素受体二亚型（hSSTR2）基因的肺腺癌A549细胞（A549-hSSTR2）受体内化的规律，探讨131I－RC-160对A549-hSSTR2细胞的杀伤作用及其对A549-hSSTR2移植瘤的抑制作用。方法：①采用放射性配基结合分析法，以125I－RC-160为放射性配基，测定A549-hSSTR2细胞及未转染hSSTR2基因的A
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种在老年期常见的神经退行性疾病，主要临床表现为进行性记忆、认知功能减退和精神障碍。AD的主要病理特征是在基底前脑、海马和大脑皮层部位细胞外的老年斑（senile plaques，SP）和细胞内神经原纤维缠结（neurofibrillary tangles，NFT），并伴有突触和神经元的缺失。Β-淀粉样蛋白（β-amyloid pro
目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是老年人常见的疾病。研究发现AD最主要的病理变化之一是b-淀粉样肽在基底核的沉积,造成胆碱能神经元损伤，导致大脑胆碱能系统的功能障碍。迄今为止，AD尚没有理想的动物模型，每种模型都只是模拟AD的一部分病理学特征，使AD的研究受到一定限制。本实验室曾成功建立了SD大鼠单侧脑基底核部位联合注射淀粉样肽Ab25-35和鹅蕈膏酸（Ibote
第一部分：EFGR基因家族shRNA真核表达质粒的构建目的：构建针对EGFR家族的shRNA干扰质粒表达载体，为本课题下一步研究提供有力工具。方法：选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家族同源性基因为靶基因，根据shRNA的设计原则，设计实验组及对照组shRNA。体外合成2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体pGensil-1的pol Ⅲ启动子下游。分别命名为
目的：通过散发性结直肠癌中hMLH1启动子甲基化的研究，探讨hMLH1甲基化在散发性结直肠癌的发生中所起的作用，并研究甲hMLH1基化与临床资料(性别、年龄、病灶部位、Dukes分期、有无淋巴结转移)的关系。方法：收集40例散发性结直肠癌患者新鲜手术切除标本，21例结直肠腺瘤(癌前病变)活检标本，14例癌旁正常组织标本。提取组织DNA后，采用甲基化特异性PCR(MSP法)扩增，8％聚丙烯酰胺凝胶电
目的：直肠癌是人类较为常见的恶性肿瘤，近年来其发病率逐渐增加，严重影响了人们的生活健康。术后局部复发和远处转移为患者死亡的主要原因。TME的临床应用和术后联合辅助治疗是局部复发率由50％降到10％左右，对五年生存率影响不大。术前外放疗可降低肿瘤局部复发率和临床分期，提高了保肛率，但副作用较大。组织间近距离植入125I粒子是一种内放射，它是将粒子植入肿瘤内部，利用其释放的γ射线持续作用于并杀死肿瘤细
目的：探讨Hsv-tk/GCV自杀基因系统联合60Co-γ射线治疗对人胶质瘤细胞系u25l的杀伤作用，并探讨其可能的机制。方法：1.取滴度为4.O×104cFU/ml HsV-tk的病毒上清液感染胶质瘤细胞系U25l，经G418阳性筛选，PCR鉴定U25l/TK细胞，转染与未转染tk基因的U251细胞按2：8混合，用于体外实验。2.实验分为对照组、GCV组、单纯放射治疗组及GCv联合放射治疗组。G
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