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目的:
1.砒霜(As<,2>O<,3>)纳米粒的制备工艺及表征；
2.研究As<,2>O<,3>纳米粒子体外对人肺癌A-549细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，并与传统的剂型亚砷酸(As<,2>O<,3>注射液)进行比较；
3.研究As<,2>O<,3>纳米粒体外诱导凋亡的分子机制；
4.As<,2>O<,3>纳米粒治疗异种移植性肺癌的研究。
材料方法：
1.采用溶胶-凝胶法制备系列As<,2>O<,3>纳米粒，用透射电镜(transmission electron microscope，TEM)、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)、能谱仪(energy dispersive spectrometer，EDS)、图像分析系统(Computer color magic image analysis system CMIAS)进行表征及特性检测。
2.采用MTT法研究As<,2>O<,3>纳米粒体外对人肺癌A-549细胞的增殖抑制作用；光镜观察As<,2>O<,3>纳米粒处理细胞后的形态学改变，并与传统的剂型亚砷酸(As<,2>O<,3>注射液)进行比较；流式细胞仪测定As<,2>O<,3>纳米粒及亚砷酸诱导细胞的凋亡率。
3.免疫组织化学法检测As<,2>O<,3>纳米粒及亚砷酸处理细胞后Bcl-2、Bax、CD44v6、P53基因的表达改变。
4.将As<,2>O<,3>纳米粒注入到裸鼠人肺癌移植瘤中，3周后测肿瘤质量抑制率及体积抑制率，通过HE切片组织学检查观察治疗后肿瘤组织的形态改变。
结果:
1.实验制备了五种不同粒径的As<,2>O<,3>纳米粒，电镜下呈圆形或椭圆形，分散性较好，平均直径大小约为80、110、130、150、450nm，经能谱仪检测证实为As<,2>O<,3>(含砷32.36％)；
2.体外细胞培养实验发现：亚砷酸和As<,2>O<,3>纳米粒均可对人肺癌细胞产生明显的生长抑制作用，并诱导癌细胞凋亡；在相同的As<,2>O<,3>浓度及培养条件下，As<,2>O<,3>纳米粒显示出比亚砷酸更强的细胞毒作用，尤其在高浓度情况下(12μmol/L)作用显著(P<0.05)。
3.流式细胞仪结果显示：中、高浓度As<,2>O<,3>纳米粒的诱导凋亡作用(12.73％,22.62％)明显强于亚砷酸(7.27％，15％)。
4.免疫组织化学显示：亚砷酸和As<,2>O<,3>纳米粒均对肺癌A-549细胞的Bcl-2基因的表达有抑制作用，对Bax基因的表达有促进作用(Bcl-2/Bax比值降低)；两者可明显的抑制肺癌A-549细胞的CD44V6基因表达，促进P53基因的表达。但在相同条件下高浓度的As<,2>O<,3>纳米粒比亚砷酸对各基因的表达作用更为明显。
5.体内抑瘤实验：As<,2>O<,3>纳米粒的质量抑瘤率与体积抑瘤率分别为I<,M>=51.26％和I<,v>=55.08％，高于其余各组，与对照组相比各组间均有统计学差异(P<0.01)。各实验组肿瘤组织有明显坏死，而瘤旁及内脏组织均未见明显损伤。
结论:
采用改良的溶胶-凝胶法可将As<,2>O<,3>制备成系列的纳米粒；体外细胞实验证实As<,2>O<,3>纳米粒抗肺癌A-549细胞的效应强于亚砷酸溶液；体内实验显示As<,2>O<,3>纳米粒能增加肿瘤的质量及体积抑制率，导致肿瘤组织坏死，具有治疗移植性肺癌的作用；免疫组织化学法实验显示As<,2>O<,3>纳米粒有较强的诱导肺癌细胞凋亡的作用，可能与其改变Bcl-2和Bax基因表达(Bcl-2/Bax比值降低)及促进P53基因的表达，同时抑制CD44v6基因表达有关。本研究为临床治疗肺癌提供了一种新的方法。