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目的:研究特定粒径与浓度的Al2O3陶瓷磨损微粒对成人成骨细胞的增殖、分化、成骨能力及相关细胞因子表达的影响,并探讨其可能机制。
方法:取成人成骨细胞原代培养,扩增,并行表型鉴定。将Al2O3陶瓷微粒按粒径不同分为3组,每组制成3种不同浓度的混悬液,消除内毒素后,加入成骨细胞培养体系,370C,5%CO2条件下孵育,传代至P2/P3代冻存备用。取与9组不同浓度与粒径的Al2O3陶瓷微粒混合培养的P2/P3代成骨细胞,分别以四氮唑盐(MTT)比色法检测成骨细胞的增殖能力;碱性磷酸酶(ALP)活性测定检测成骨细胞的分化能力;茜素红染色钙结节计数检测成骨细胞的成骨潜力。利用逆转录.聚合酶链反应(RT—PCR)检测核转录因子NFκB的配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、骨钙素(OCN)在基因表达方面的差异。
结果:碱性磷酸酶活性测定与四氮唑盐比色法检测结果示大微粒(>10um)高浓度(微粒:细胞=200:1)组,中等粒径(1-10um)中浓度组(微粒:细胞=100:
1)及大微粒低浓度(微粒:细胞=50:1)组的Al2O3陶瓷微粒可抑制成骨细胞的增殖,分化,p<0.01。RT—PCR也表明OPG、OCN基因表达方面低于空白对照组,而RANKL的基因表达高于空白对照。p<0.01,有极显著差异。
结论:Al2O3陶瓷磨损微粒可直接作用于成骨细胞,抑制成人成骨细胞的增殖与ALP活性,其细胞反应与微粒的粒径与浓度存在关联。