[目的]观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS) TNF-α、IL-1β表达的影响,并尝试与传统治疗药物MTX联合应用进行研究。[方法]第一部分：选用Ⅱ型胶原诱导方法免疫雄性SD大鼠作为RA的动物实验模型。分别从外观、血清学检测、病理学检测、影像学检测等方面对CIA大鼠模型进行评价。第二部分：组织块培养法体外分离纯化正常大鼠和CIA大鼠膝关节滑膜组织中的FLS细胞(N-FLS和CIA-FLS),分别从形态学、细胞免疫化学、生长特性特征方面对FLS进行对比鉴定。ELISA法检测N-FLS和CIA-FLS细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平。第三部分：实验分为空白组、MTX组、GA组和GA+MTX组4组,分别对CIA-FLS细胞进行体外药物干预实验。利用CCK-8比色法测定各组药物CIA-FLS细胞增殖的抑制作用,计算IC10作为各组药物的实验浓度。每组分别干预1天、3天、5天。Real time qPCR法检测各组CIA-FLS细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,ELISA法检测各组CIA-FLS细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平。[结果]第一部分：CIA造模组大鼠中有7只(14只)AI值≥4分；CIA组大鼠一般情况较差,初次免疫2周后开始体重增长明显减慢(P<0.05)；初次免疫后4周CIA组大鼠X光片示骨质疏松、皮质骨边缘不光滑、关节间隙狭窄甚至消失等表现；后足组织病理切片示滑膜内大量炎症细胞浸润,滑膜细胞增生、排列紊乱,并且形成血管翳,关节软骨及骨破坏；CIA组大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.05)。第二部分：第3代以后FLS细胞形态均一,光镜下呈极性排列的长梭形,免疫细胞化学染色检测结果示Vimentin+/CK+/CD68—,FLS纯度>95%。CCK-8比色法测定CIA-FLS倍增时间约5d,N-FLS倍增时间约7d。CIA-FLS细胞上清液TNF-α、IL-1β水平比N-FLS细胞上清液中高(P<0.05)。第三部分：CCK-8比色法测定MTX、GA和GA+MTX干预72h,对CIA-FLS细胞增殖抑制作用的IC10值分别为：28uM、0.3uM、12uMGA+0.13uM MTX.Real time PCR结果提示,MTX、GA和GA+MTX三组干预CIA-FLS 1天,TNF-α、IL-1βmRNA表达均降低,但与对照组比较差异尚无统计学意义(P>0.05)。3天,MTX、GA和GA+MTX三组TNF-α、IL-1βmRNA表达均降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；三组组间差异无统计学意义(P>0.05)。5天：MTX、GA、GA+MTX均可明显抑制]fNF-α、IL-1βmRNA表达(P<0.05)；处理组间差异有统计学意义,按照强弱依次是GA+MTX>MTX>GA (P<0.05)。MTX、GA、GA+MTX抑制TNF-α、IL-1βmRNA表达均呈实效依赖性,即随着作用时间延长,抑制作用越明显(P<0.05)。ELISA结果示：细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平变化与PCR结果相平行。[结论]1.GA、MTX、GA+MTX三组对CIA-FLS炎症因子TNF-α、IL-1β的抑制作用依次递增,并随时间延长,作用越明显；2.GA和MTX两者联合作用强于MTX单独用药,提示两者联合可能有协同抑制CIA-FLS炎症因子表达的作用。