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猪类嗜乳脂蛋白5(Btnl5)属于嗜乳脂蛋白家族，其同源蛋白多为免疫调节蛋白。Btnl5表达序列标签(ESTs)定位于小肠，但其cDNA全长、蛋白结构、蛋白的组织亚定位、蛋白功能及作用机制未知。在该研究中，我们使用cDNA末端快速克隆技术(RACE，rapid-amplification of cDNA ends)得到Btnl5基因cDNA全长共3334bp，包含1680bp的开放读码框，编码长度为559个氨基酸残基的多肽链。Btnl5蛋白经预测具有多处磷酸化及糖基化修饰，并且Btnl5-Myc及Btnl5-Flag融合蛋白的大小为70kDa左右，比单纯氨基酸分子量(61.87kDa)大，证明该蛋白确实经历了翻译后修饰。蛋白结构预测表明Btnl5蛋白含有信号肽、两段胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域和胞内的B30.2结构域。定量PCR分析表明，Btnl5在空肠中具有较高水平的表达，而在同为肠道组织的结肠则表达极低。为明确Btnl5在空肠中的组织亚定位，我们将Btnl5的胞内区克隆连入原核表达载体，表达纯化后在小鼠中制备了Btnl5抗血清，采用免疫组织化学染色检测Btnl5在空肠中的定位，实验发现Btnl5主要定位于空肠上皮细胞中，且在膜上的染色较深。将Btnl5-Myc质粒转入293T细胞，使用anti-Myc抗体Western检测Btnl5-Myc融合蛋白的定位，发现Btnl5-Myc主要定位于细胞膜，少量定位于细胞内，结合免疫组织化学染色的结果说明Btnl5主要定位于小肠上皮的细胞膜上。NF-κB报告基因检测显示Btnl5对NF-κB信号通路具有抑制作用。利用Btnl5的截短突变体发现胞内B30.2结构域起主要的抑制作用。胞外的免疫球蛋白结构域和胞内的B30.2结构域是蛋白相互作用结构域，为探索Btnl5抑制NF-κB信号通路的机制，我们通过免疫共沉淀和质谱分析，得到1270个Btnl5相互作用蛋白，其中有4个蛋白参与了NF-κB信号通路:TRAF2、p65、TRIM25和RIP1，并且TRAF2和p65经过验证确实与Btnl5结合。P65-p50二聚体入核是NF-κB信号通路活化的关键步骤。我们使用Western检测了Btnl5对p65入核的影响，实验结果显示Btnl5的过表达抑制了MyD88激活的p65入核，并且Btnl5的过表达抑制了p65激活的NF-κB信号通路，这些结果说明，Btnl5可能通过与p65结合，将其绑定于细胞膜上，阻止p65-p50二聚体的入核，抑制了NF-κB信号通路，防止NF-κB信号通路过度活化。而NF-κB信号通路在肠道免疫调节中起到关键的调控作用，Btnl5可能通过抑制NF-κB信号通路的过度活化从而预防肠道炎症的发生。