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本论文是由两个部分构成的,主要讨论了杆状病毒的遗传改良和应用。
第一部分:杆状病毒的安全性、基因组虽小但容量大,操作简单等特点使它们作为表达载体和生物杀虫剂得到了不断的发展和改进。本部分主要就棉铃虫单粒包埋核多角体病毒表达系统的构建和生物性能的研究作了详细的阐述,以期为HaSNPV的应用和研究提供更多的材料和背景,并为HaSNPV的基础研究和新型杆状病毒杀虫剂的研制提供理论依据。本部分由四章组成:
第一章针对杆状病毒的研究状况作了综述报道,主要是对杆状病毒的基础研究和应用两个方面进行阐述,特别是对杆状病毒的蜕皮甾体脱氧尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(egt)基因的研究进展和杆状病毒表达载体系统的研究进展进行了详细的报道。
第二章利用同源重组成功地构建了egt基因缺失的HaBacmid,根据HindⅢ的酶切图谱鉴定了所得克隆的基因型,得到一个HaBacmid基因组文库,并且鉴定出一株基因型完整的Bacmid克隆。
第三章对基因型完整的HaBacYH9作了系统的生物学活性的测定,表明它具有作为杆状病毒表达系统和生物杀虫剂的应用前景。
第四章对文库中另外两个Bacmid克隆的研究发现:HaBacYH6具有一种新的多角体表型,并且证明了该表型与fp25k基因的缺失不直接相关;egt基因不是控制杆状病毒对幼虫半致死时间的唯一条件。
第二部分:探讨了PPV HB株的vp2基因和国际上其它的流行毒株及疫苗株在核苷酸和氨基酸序列上的差异,并制备了VP2的多克隆抗血清。利用杆状病毒Ac Bac-to-Bac系统在真核细胞中成功构建了PPV类病毒颗粒,以期为猪细小病毒病发病机理的阐明和临床上该病的防治提供实验依据。研究内容如下:
第一章对猪细小病毒的分类、形态结构、分子生物学特点及其疫苗的研究进展作了阐述。
第二章从PPV HB株的全基因组得到了vp2基因,对其进行了克隆、测序和序列分析。对VP2进行了原核表达并制备了高特异性的兔抗血清,为VP2的免疫研究奠定了基础。
第三章利用Ac Bac-to-Bac系统在真核细胞内成功构建了PPV的类病毒颗粒,为PPV的亚单位疫苗和多价疫苗的研制提供了理论依据。