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目的:研究α肾上腺素能受体激动对人外周血单核细胞TLR4信号通路及其中相关因子变化影响,探讨α肾上腺素能受体与TLR4的相互作用及其调控机制。方法:采集健康青年人外周静脉血,进行离体实验。(一)观察不同剂量α受体激动剂去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)对人外周血单核细胞TLR4蛋白及mRNA、P38mRNA、NF-κBp65的影响及上清中炎症因子IL-6、IL-18的变化,选取10例健康青年人各抽取外周静脉血32ml,经EDTA抗凝后每份血均分为空白组、25μmol/L去甲肾上腺组、50μmol/L去甲肾上腺组、75μmol/L去甲肾上腺组,孵育18h后,用ELISA法测定血液离心后上清液中IL-6、IL-18的浓度,分离单核细胞后用流式细胞仪测定CD14+单核细胞TLR4阳性细胞百分率,提取RNA后采用RT-PCR测定TLR4mRNA及P38mRNA的表达,免疫组化法测定NF-κBp65蛋白的表达;(二)利用siRNA干扰技术使TLR4mRNA保持静默,观察用α受体激动剂NE刺激后相关因子浓度变化情况,选取10例健康人各抽取外周静脉血16ml,经EDTA抗凝后每份血均分为空白组、75μmol/L去甲肾上腺组、1nmol Scramble siRNA+0.24ml转染液组、1nmol TLR4 siRNA+0.24ml转染液组,转染18h后用ELISA法测定血液离心后上清液中IL-6、IL-18的浓度,分离单核细胞后爬片培养,免疫组化法测定NF-κBp65蛋白的表达。(三)利用不同阻滞剂分别阻断α受体、P38MAPK、PKA、PKC后,再用α受体激动剂NE刺激,观察TLR4蛋白表达量的变化,选取10例健康青年人各抽取外周静脉血6ml,经EDTA抗凝后每份血均分为25μmol/Lα受体阻滞剂酚妥拉明组、15μmol/L P38MAPK抑制剂SB 202190组、15μmol/L pKA抑制剂H89组、15μmol/L pKC抑制剂Go6983组,并设空白对照组、75μmol/L去甲肾上腺组,孵育0.5h后,再加入75μmol/LNE孵育18h后,采用流式细胞仪测定CD14+单核细胞TLR4阳性细胞百分率。结果:1、应用不同浓度的α受体激动剂NE刺激人外周血单核细胞后,TLR4蛋白及mRNA、P38mRNA、核内NF-κBp65蛋白、上清中IL-6及IL-18的表达呈剂量依赖性升高:NE75组、NE50组分别与空白组及NE25组比较均明显升高,(p<0.05,p<0.01),NE75组与NE50组比较明显升高(p<0.05),NE25组与空白组比较无明显升高(p>0.05);2、TLR4mRNA干扰后α受体激动剂NE刺激血液离心后上清液中IL-6及IL-18、单核细胞NF-κB P65蛋白的表达为:Si+NE75组均明显低于空白组、Sc+ NE75组及NE75组(P<0.05);3、分别阻断α受体、P38MAPK、PKA、PKC后,用有效浓度NE(75μmol/L)刺激外周血单核细胞,观察TLR4蛋白的表达量为:α-blocker组、P38组、PKA组与NE75组比较均明显降低(p<0.05),各组与空白组比较未见明显差异(p>0.05),PKC组与NE75组及空白组比较均明显增加(p<0.05)。结论:1)α受体激动剂呈剂量依赖性诱导人外周血单核细胞TLR4信号通路激活,以75μmol/L去甲肾上腺素为最佳剂量;2)α受体、P38MAPK、PKA、NF-κB P65介导了α受体激动剂诱导的TLR4信号通路激活。