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目的:非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是现代社会中影响人类健康的一个危险因素,其发病机制尚未完全阐明。本实验旨在探讨梓醇对非酒精性脂肪肝起治疗作用的机制,用棕榈酸酯(palmitic acid,PA)诱导的HepG2细胞作为非酒精性脂肪肝细胞模型,验证梓醇对其脂质蓄积、细胞凋亡和氧化应激的抑制作用,以及是否通过上调miR-96-5p抑制P66Shc/Cyto C途径达到。方法:本实验需验证以下几个问题,其一,梓醇是否可以改善PA诱导的HepG2细胞模型的脂质蓄积和细胞凋亡。把实验分为三组,正常HepG2细胞为对照组,HepG2细胞+PA为模型组,HepG2细胞+PA+catalpol为治疗组,可以通过尼罗红染色、TUNEL染色、DNPI染色测定细胞中脂质蓄积及细胞凋亡以验证。其二,梓醇是否可以抑制PA诱导的HepG2细胞模型中的氧化应激。把实验分为六组,正常HepG2细胞为对照组,HepG2细胞+catalpol为梓醇组,HepG2细胞+PA为模型组,HepG2细胞+PA+catalpol为治疗组,分别加入5、20、80μM梓醇分为低浓度组、中浓度组、高浓度组,通过Western blot检测各组中P66Shc和Cyto C的表达水平,验证梓醇对细胞模型中氧化应激的抑制作用,并探讨抑制作用与梓醇浓度是否呈相关性。其三,梓醇是否通过miR-96-5p/P66Shc/Cyto C通路以达到改善脂质蓄积、细胞凋亡和氧化应激作用。把实验分为四组,正常HepG2细胞为对照组,HepG2细胞+PA为模型组,HepG2细胞+PA+agomir-96-5p为上调组,HepG2细胞+PA+catalpol为治疗组,通过尼罗红染色、TUNEL染色、DNPI染色、Western Blot、q PCR检测各组中脂质蓄积、细胞凋亡和氧化应激的程度,通过上调组和治疗组的对比可以验证梓醇是否通过miR-96-5p/P66Shc/Cyto C通路以达到其治疗效果。结果:荧光显微镜下可见模型组中脂质蓄积及细胞凋亡较对照组显著增多,而加入梓醇后的治疗组中,脂质蓄积及细胞凋亡明显减少。Western blot结果显示,模型组中P66Shc和Cyto C的表达较对照组显著增加(P<0.05),而加入梓醇的治疗组中P66Shc和Cyto C的表达明显被抑制(P<0.05),但比较低浓度组、中浓度组、高浓度组发现梓醇的浓度与其抑制效果不呈正相关性。使用agomir-96-5p上调miR-96-5p表达后,上调组与模型组对比,荧光显微镜下可见上调组脂质蓄积和细胞凋亡明显减少,Western blot结果显示上调组中p66shc和Cyto C的表达被显著抑制(P<0.05)。上调组与梓醇组对比,发现两组对脂质蓄积、细胞凋亡和p66shc和Cyto C的表达抑制效果无统计学差异。结论:梓醇可以抑制PA诱导的HepG2细胞模型中脂质蓄积、细胞凋亡和氧化应激,且其是通过影响miR-96-5p/P66Shc/Cyto C通路,显著提高PA诱导的HepG2细胞中miR-96-5p水平,降低p66shc、Cyto C表达以达到梓醇的抑制效果。